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猪瘟(Classical swine fever,CSF)是猪的一种高度接触性传染病,以发热和出血为主要特征。世界动物卫生织(OIE)将其列为16种A类传染病之一,我国亦将之列为一类动物传染病。目前,CSF主要分布在亚洲、非洲、南美洲和欧洲的40多个国家和地区。调查显示,现阶段CSF仍是对全球养猪业威胁最大的疾病,我国是猪瘟流行较严重的国家,我省各地也时常有猪瘟发生,每年因猪瘟死亡的猪占饲养总数的3%～5%,造成巨大的经济损失,因此对猪瘟的快速诊断和防制仍然具有十分重要的意义。2007年6月贵州铜仁某猪场爆发了疑似猪瘟的疫情,通过流行病学调查、临床症状观察、病理剖检变化、金标卡检测、兔体交互试验及RT-PCR实验诊断后确诊为猪瘟。然后根据GenBank登录的猪瘟病毒shimen, C株的E2基因序列设计一对特异引物,采摘病死猪的血液、扁桃体、淋巴结、脾、肾等组织提取总RNA,并进行RT-PCR扩增,通过电泳检测和测序后获得预期目的DNA条带,并将其纯化后与pMD18-T载体连接、转化到TOP10感受细胞中,在含Amp的琼脂培养基中加入IPTG和X-gal诱导培养,挑选白色菌落培养抽提质粒,用BamHI和HindⅢ酶切鉴定和测序后,将测序结果用DNAStar和DNAMAN软件与GenBank登录的猪瘟病毒shimen, C株进行核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比较及遗传进化关系分析,并绘制遗传进化树。结果表明：该流行毒株与猪瘟病毒shimen, C毒株的同源性为98.9%和94.9%氨基酸同源性为99.7%和98.1%,而与邻近省份流行毒株有一定差异,同时证明E2基因克隆成功。在上述实验基础上,培养含pMD18-T-E2质粒的阳性菌落,提取pMD18-T-E2质粒,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定纯化后,分别与双酶切的原核表达质粒pET-32a(+)载体和真核表达载体pcDNA3.1(+),在T4连接酶作用下16℃连接过夜,然后分别转入感受态细胞BL21和TOP10中,涂布平板,37℃过夜培养,通过抗性筛选、酶切鉴定和序列测定,表明原核表达质粒pET32a- E2和真核表达质粒pcDNA3.1-E2构建成功,该研究为进一步研究猪瘟病毒贵州流行株E2基因的体外表达、开发新型诊断试剂盒和新型疫苗的研究奠定了基础。