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第一部分牛磺熊去氧胆酸减轻顺铂致听毛细胞损伤目的:探明牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）对顺铂致大鼠听力损失的拮抗效应,揭示TUDCA对顺铂作用下听毛细胞的保护作用及量效关系。方法:（1）体内实验:选用12只健康成年雄性SD大鼠,给予腹腔泵注12mg/kg顺铂（持续时间>30分钟）。右耳于顺铂给药前1小时鼓室注射0.5mg/ml无菌TUDCA,左耳注射等量PBS。分别于给药前后进行听性脑干反应（ABR）检测,比较左右耳ABR反应阈阈移的改变。（2）体外实验:选用出生后3天的SD大鼠,解剖耳蜗基底膜用于离体培养,并随机分为对照组、顺铂组及顺铂+TUDCA组。以myosin7a标记毛细胞,免疫荧光法观察各组外毛细胞形态差异,并分别计数顶、中及底回相同长度范围内外毛细胞存活率的差异。TUNEL法检测组间外毛细胞凋亡比例的差异。选用OC1听毛细胞株,以浓度梯度的顺铂处理24h,CCK8法检测组间细胞增殖率的差异。选用10μM顺铂建立OC1听毛细胞株损伤模型,并以不同浓度TUDCA分别预处理0h、6h、12h、24h,CCK8法检测组间细胞存活率的差异,并筛选出TUDCA最佳作用时间及浓度,Annexin V-FITC/PI法检测此浓度及作用时间下组间细胞凋亡比例的差异。结果:（1）体内实验:右耳（鼓室注射TUDCA）ABR反应阈阈移（click:2.50±2.79d B SPL,8k Hz:23.33±5.52 d B SPL,16k Hz:20.00±6.09 d B SPL,24k Hz:28.33±5.16d B SPL,32k Hz:42.08±4.50 d B SPL,40k Hz:36.25±3.84 d B SPL）明显低于左耳（鼓室注射PBS）（click:9.17±3.93 d B SPL,8k Hz:35.83±5.32 d B SPL,16k Hz:37.50±4.75 d B SPL,24k Hz:47.50±3.17 d B SPL,32k Hz:61.67±3.22 d B SPL,40k Hz:55.83±1.83 d B SPL）。刺激声为短声（click）时,组间差异无统计学意义,刺激声为短音时,所有频率的组间差异均具有统计学意义（p<0.05）。（2）体外实验:耳蜗基底膜离体培养条件下,对照组外毛细胞形态良好,顺铂组外毛细胞排列紊乱且有缺失。与顺铂组（外毛细胞存活率:顶回:198.00±20.17,中回:141.75±12.91,底回:138.50±22.50）相比,顺铂+TUDCA组外毛细胞排列整齐且存活率（顶回:232.50±24.36,中回:201.25±7.51,底回:186.75±20.19）较高。1m M TUDCA单独处理离体培养的耳蜗基底膜,外毛细胞的形态和数量与对照组相比没有明显变化。TUNEL检测结果显示,顺铂组外毛细胞凋亡比例（顶回:2.33±1.86,中回:14.33±1.45,底回:11.33±0.33）高于顺铂+TUDCA组（顶回:0.00±0.00,中回:3.33±1.86,底回:2.33±1.45）。在OC1细胞中,随着顺铂浓度的增加,OC1细胞的存活率逐渐降低。TUDCA不同浓度预处理0h、6h及12h,顺铂+TUDCA组细胞的存活率与顺铂组相比无统计学意义。1.6m M TUDCA预处理24h细胞的存活率（88.03%±6.53%）明显高于顺铂组（57.37%±2.05%）（p<0.05）。流式细胞术凋亡检测结果表明,顺铂+TUDCA组细胞凋亡比例为1.68%±0.33%,明显低于顺铂组（8.21%±0.61%）（p<0.05）。结论:（1）TUDCA鼓室给药可减轻顺铂致大鼠ABR反应阈阈移的增加;（2）TUDCA可抑制顺铂作用下听毛细胞的凋亡。第二部分内质网蛋白质质量控制系统在牛磺熊去氧胆酸减轻顺铂致听毛细胞损伤中的作用机制目的:揭示耳蜗听毛细胞在TUDCA和（或）顺铂作用下,内质网蛋白质质量控制（ERQC）系统中关键蛋白的表达变化。阐明ERQC系统在牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）减轻顺铂致听毛细胞损伤中的可能机制。方法:（1）选用出生3天SD乳鼠,制备顺铂致听毛细胞损伤的耳蜗外植体模型,并分为对照组、顺铂组及顺铂+TUDCA组。顺铂组:5μM顺铂处理48h;顺铂+TUDCA组:1m M TUDCA预处理24h,而后继续与顺铂共处理48h。通过RT-q PCR及免疫荧光法检测组间外毛细胞ERQC系统相关关键成员caspase12、CRT及UGGT1的表达差异。（2）选用OC1细胞株,将其分为对照组、顺铂组及顺铂+TUDCA组。顺铂组:10μM顺铂处理24h,顺铂+TUDCA组:1.6 m M TUDCA预处理24h后,再与顺铂共处理24h。免疫印迹法检测组间ERQC系统中关键蛋白表达水平的差异。流式细胞术检测下调CRT、UGGT1及OS9后,TUDCA拮抗顺铂致OC1细胞凋亡作用的变化。（3）分别在0.2%BSA溶液中加入5 m M DTT、10 m M TUDCA以及不同浓度的顺铂,75℃加热10min、20min、30min、40min、50min及60min,用酶标仪检测492 nm下的OD值。结果:（1）RT-q PCR检测结果显示,与顺铂组相比,顺铂+TUDCA组中caspase-12、UGGT1及OS9的表达有所下降,而CRT的表达则有所升高。免疫荧光结果显示,组间UGGT1的表达变化与RT-q PCR检测结果一致,而顺铂+TUDCA组中CRT的表达与顺铂组相比没有统计学意义。（2）OC1细胞中组间caspase-12及UGGT1的表达变化同离体培养基底膜相一致。与顺铂组相比,顺铂+TUDCA组中总泛素化蛋白尤其是大分子量泛素化蛋白的表达较高,而CRT的表达变化没有统计学意义。下调CRT、UGGT1及OS9的表达可减弱TUDCA对顺铂致OC1细胞凋亡的抑制作用。（3）体外蛋白质聚集实验表明,不含DTT的0.2%BSA溶液在75℃加热60分钟后没有出现沉淀,而含有5 m M DTT的BSA溶液在相同条件下出现沉淀,且随着加热时间的延长沉淀量也逐渐增加。在同时含有5 m M DTT和顺铂的BSA溶液中,且在相同的加热条件下,溶液的浑浊度随顺铂浓度的增加而降低。而同时含有10 m M TUDCA及5 m M DTT的BSA溶液,在75℃加热60分钟后没有出现明显的沉淀,这种现象的发生与顺铂的存在和浓度均无相关性。结论:TUDCA可抑制内质网蛋白质毒性聚集,提高泛素依赖性ERAD的降解能力,减轻顺铂致听毛细胞的损伤。