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目的：肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）是各种致病因素引起的肝损伤的修复反应，同时又是慢性肝病进展成肝硬化的共同病理基础及必经阶段。我国是肝病高发国家，以慢性乙型肝炎、丙型肝炎最常见，严重影响我国人民平均寿命和生活质量，故阻止或逆转肝纤维化进程是治疗慢性肝病、改善预后的重要手段。肝纤维化主要特征是细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）合成增多、降解减少，从而在肝内过度沉积。肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSC）是肝脏合成ECM的主要来源细胞，其激活、增殖后表达各种信号转导蛋白，合成大量ECM，是形成肝纤维化的中心环节。TGF-βl是目前已知的功能最明确和作用最强的促肝纤维化细胞因子，在促进HSCs合成分泌ECM中发挥重要作用。TGF-β1与HSCs表面具有高亲和力的TGF-β受体(TGF-β receptor,TβR)结合形成TGF-β1-TβR复合体，而后进一步磷酸化下游信号因子--Smad蛋白，将信号转入细胞核内，启动HSCs活化增殖。随着肝纤维化发生机制的不断阐明，中西医都在进行防治肝纤维化的有益探索。一些西药的研究取得了一定进展，如过氧化物酶体增殖物活化受体（γperoxisome proliferators-activatedreceptorgamma,PPARγ），是一种配体激活的核受体转录因子，静止状态HSC表达PPARγ，而活动状态的HSC表达PPARγ明显减少，PPARγ表达减少与HSC激活密切相关。目前认为罗格列酮是PPARγ的配体，作为PPARγ的激动剂，可增加肝内胶原酶活性,减少肝内胶原积聚和抑制HSC的增殖。在中医药方面，以活血化瘀为主的中医药(traditional Chinesemedicine,TCM)治疗肝纤维化亦取得一定效果，中药对肝纤维化有良好的预防和治疗作用，且具有多环节、多层次、多靶点的综合药理学特点及低毒副作用的优点。鳖甲煎丸以往系列研究证实具有抑制胶原合成及HSC活化增殖、改善肝功能的作用，但作用机制尚未明确。本项研究采用中药血清药理学的方法，通过观察不同浓度鳖甲煎丸药物血清对TGF-β1刺激的大鼠HSC活化增殖、TGF-β1Smad信号转导通路及ECM合成的影响，探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化作用及可能机制，并与罗格列酮相比较。方法：1采用血清药理学方法制备大鼠药物血清，将25只大鼠按体重随机分为五组，鳖甲煎丸与罗格列酮均用无菌蒸馏水制备药物混悬液，鳖甲煎丸分别按成人剂量的3.5、7、14倍灌胃给药，作为中药低、中、高剂量组；罗格列酮按成人剂量的7倍灌胃给药，作为西药组；对照组灌服等体积蒸馏水。给药7次后下腔静脉取血，制备药物血清，配置10%大鼠含药血清的FBS-DMEM培养液作为药物治疗组：10%正常大鼠血清的FBS-DMEM培养液作为对照组，含5ug/L【1】TGF-β1的10%正常大鼠血清的FBS-DMEM培养液作为模型组。模型组和四个治疗组分别加入模型组培养液24h后，吸去上清液，再加入对照组和各治疗组药物血清培养液继续培养。2药物血清体外培养HSC及指标检测：应用HSC细胞株体外培养技术，在37℃细胞培养箱中，待细胞在DMEM培养液中贴壁后，换用无血清DMEM同步化培养24h，再换用各组干预培养基按上述方法干预细胞24h，进行指标检测：①吸光度(optical density，OD)：MTT法②ColIV，LN：放射免疫法③TβR I、TβR Ⅱ、Smad3、Smad7：反转录聚合酶联反应(RT-PCR)。结果：1MTT结果显示：与对照组相比，模型组及除鳖甲煎丸高剂量组之外的各药物干预组OD值明显增高（P﹤0.05）；与模型组相比，各药物干预组OD值均明显减低(P﹤0.05)；与罗格列酮组相比，鳖甲煎丸高剂量组OD值明显减低(P﹤0.05)，鳖甲煎丸中剂量组OD值无统计学差异(P﹥0.05)，鳖甲煎丸低剂量组OD值明显增高(P﹤0.05)；鳖甲煎丸低、中、高剂量组OD值依次减低(P﹤0.05)；鳖甲煎丸高剂量组和对照组OD值无统计学差异（P﹥0.05）。2放免结果显示：与对照组相比，模型组及各药物干预组ColIV，LN含量明显增高（P﹤0.05）；与模型组相比，各药物干预组ColIV，LN含量均明显减低(P﹤0.05)；与罗格列酮组相比，鳖甲煎丸高剂量组ColIV，LN含量明显减低(P﹤0.05)，鳖甲煎丸中剂量组ColIV，LN含量无统计学差异(P﹥0.05)，鳖甲煎丸低剂量组ColIV，LN含量明显增高(P﹤0.05)；鳖甲煎丸低、中、高剂量组ColIV，LN含量依次减低(P﹤0.05)。3RT-PCR结果显示：与对照组相比，模型组及各药物干预组TβR I、TβR Ⅱ、Smad3表达明显增高，各药物干预组Smad7mRNA表达明显增高（P﹤0.05）；与模型组相比，各药物干预组TβR I、TβR Ⅱ、Smad3mRNA表达均明显减低，Smad7mRNA表达明显增高(P﹤0.05)；对照组与模型组Smad7mRNA表达无统计学差异（P﹥0.05）；与罗格列酮组相比，鳖甲煎丸高剂量组TβR I、TβR Ⅱ、Smad3mRNA表达明显减低，Smad7mRNA表达明显增高(P﹤0.05)，鳖甲煎丸中剂量组TβR I、TβR Ⅱ、Smad3、Smad7mRNA表达无统计学差异(P﹥0.05)，鳖甲煎丸低剂量组TβR I、TβR Ⅱ、Smad3mRNA表达明显增高，Smad7mRNA表达明显降低(P﹤0.05)；鳖甲煎丸低、中、高剂量组TβR I、TβR Ⅱ、Smad3mRNA表达依次减低，Smad7mRNA表达依次增高(P﹤0.05)。结论：1TGF-β1可在TβR、Smads不同位点激活TGF-β Smad信号转导通路，促进HSC增殖活化和ECM合成分泌；抑制性蛋白Smad7对TGF-β Smad信号转导通路的负反馈作用不能持久，这可能是肝纤维化持续发展的原因之一。2不同剂量鳖甲煎丸和罗格列酮药物血清均可抑制TGF-β1上述作用，其作用可能与在不同位点抑制TGF-β Smad信号转导有关。但其对下游因子的作用是否为对上游因子作用的级联反应，仍需进一步研究证实。3两药都无法使HSC状态恢复到TGF-β1刺激前水平,不能完全阻断TGF-β1刺激活化的TGF-β/Smad信号转导通路，这可能是药物难以完全修复肝细胞损伤、逆转肝纤维化的主要原因之一。4鳖甲煎丸抗纤维化作用呈剂量浓度依赖性,即随着药物剂量浓度增高，效果逐渐增强。