论文部分内容阅读
埃博拉出血热(EHF)是由埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的一种急性出血性传染病,人感染后致死率高达90%,是人类危害最严重的传染病之一,对公共卫生安全和人类的健康有很大的威胁。到目前为止,EHF还没有有效治疗的药物和疫苗,而且在我国尚无此病症出现。因此,建立一种快速、准确和敏感的检测方法显得尤为重要。本文为了建立快速敏感的荧光定量RT-PCR检测EBOV的方法,根据GenBank中公布的EBOV NP基因序列,设计引物和MGB探针,通过优化反应条件,建立了一种检测EBOV S/Z的一步法MGB荧光定量RT-PCR方法和一种检测EBOV的SYBRGreen Ⅰ荧光定量RT-PCR方法。以体外转录的EBOV RNA为模板,该方法检测的灵敏度可以达到1.0×103个拷贝/μ l,检测范围达到8个数量级为103-1010。建立的方法对马尔堡病毒(MARV)、登革病毒(DENV)、新疆出血热病毒(XHFV)、乙型脑炎病毒(JEV)、流感病毒(H1N1和H3N2)和猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)E基因组RNA无非特异性扩增。本文将荧光定量RT-PCR技术用于埃博拉病毒的定量检测中,并且建立了One step MGB荧光定量RT-PCR检测EBOV S/Z和SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测EBOV的方法,具有一定的创新性。该方法的建立对加快我国EBOV诊断技术的研究具有重要推动作用。用建立好的两种方法对我国不同地区不同物种的易感动物进行检测,结果显示我国暂时还未发现EBOV。