论文部分内容阅读
研究目的1、探讨杏仁体注射Aβ25-35对大鼠学习记忆功能、脑皮质和海马tau蛋白异常磷酸化(Pser404-tau)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响。2、在阿尔茨海默病(AD)模型的基础上进行2-VO手术,探讨脑缺血对AD的影响。3、观察2-VO术后大鼠脑中Pser404-tau、ChAT和AchE的变化,探讨脑缺血是否可以引起类AD样改变。4、通过葛根素(Pue)对脑缺血大鼠和AD大鼠的干预研究,探讨Pue治疗AD的机理。研究方法1、模型的制作:AD模型的制作:SD大鼠以0.4%戊巴比妥钠麻醉,于脑立体定位仪下定位右侧杏仁体,用微量注射器缓慢匀速注入Aβ25-35 (5.0nmol/3μl);脑缺血(CI)模型的制作:SD大鼠麻醉后,分离双侧颈总动脉,永久结扎左侧,右侧夹闭60min后放开;AD+CI模型的制作:立体定位术后14天,将AD大鼠行脑缺血处理,方法同CI组。2、Pue治疗组于立体定位术后14天/缺血手术后腹腔注射给药,剂量为80mg/kg/d,共7天。3、分别在实验前、立体定位术后14天、21天进行Y-迷宫试验,检测大鼠学习记忆能力。4、立体定位术后21天(即缺血术后7天)处死所有大鼠,应用免疫组化方法测定各组大鼠皮质和海马Pser404-tau、ChAT阳性细胞数的表达;应用比色法检测各组大鼠双侧海马AchE蛋白含量及活性的变化。研究结果1、Aβ25-35、脑缺血对SD大鼠的影响:Aβ25-35单侧杏仁体一次性注射可导致大鼠学习记忆功能障碍;AD模型大鼠皮质、海马的Pser404-tau阳性细胞数显著增高(P<0.01),ChAT活性明显降低(P<0.01);AD模型大鼠右侧海马AchE蛋白含量、活性明显降低(P<0.05),左侧海马AchE蛋白含量及活性均无明显变化(P>0.05)。CI组大鼠皮质、海马Pser404-tau阳性细胞数增高而ChAT活性降低(P值均小于0.05),双侧海马AchE蛋白含量和活性均降低(P<0.05),且右侧海马AchE的变化较左侧更为显著。2、脑缺血对AD的影响:相对于AD模型组,AD+CI组大鼠的记忆功能进一步下降,皮质和海马Pser404-tau阳性细胞数上升,ChAT活性下降(P<0.05),右侧海马AchE蛋白含量降低,AchE活性也下降(P<0.05)。3、Pue可显著改善AD、缺血大鼠的学习记忆功能(P<0.05);相对于AD/CI模型组,Pue治疗组Pser404-tau的阳性细胞数显著降低,而ChAT表达明显升高(P<0.05);右侧海马AchE含量及活性升高(P<0.05)。研究结论1、杏仁体注射Aβ25-35产生的神经毒性作用可导致脑内Ser404位点的tau蛋白异常磷酸化和胆碱能系统功能损害。2、脑缺血可加重AD病变。3、脑缺血可导致AD病变。4、Pue能够改善AD的病理反应,缓解AD大鼠学习记忆障碍,其机制可能与Pue对抗β-淀粉样肽(Aβ)的神经毒性,扩张脑血管、改善微循环从而抑制tau蛋白异常磷酸化,提高中枢胆碱能系统功能有关。