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实验目的:类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性炎性疾病,主要病理表现为骨和软骨的进行性破坏,以及大量的炎症细胞对滑膜组织强烈的破坏性侵润,最终导致关节畸形,僵硬和功能障碍。目前的医疗管理对于RA的功效有限,并且该疾病通常终生进展。成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),也称为滑膜成纤维细胞或B型滑膜细胞,是关节滑膜内膜结构的主要细胞类型。TNF-α作为一种非常重要的细胞因子,广泛应用于RA体外微环境的模拟。RA的主要治疗目的是减缓关节炎症,减轻关节疼痛,预防疾病进展,尽可能保护关节和周围肌肉的功能,最终减少疾病活动和改善患者生活质量。现如今,已经引入了许多用于治疗RA的药物并且已经在临床上使用。例如,抗风湿药(DMARD),非甾体抗炎药(NSAID),糖皮质激素等,但它们或多或少都带有副作用,都不是最好的治疗方法。一些植物药如雷公藤和青藤碱对RA也有一定的作用,但其作用机制尚不清楚。白皮杉醇(PIC)是一种化学结构类似于白藜芦醇的化合物。以前的研究表明它们具有相似的生物活性,如抗氧化,抗癌,抗炎和扩张血管等。尚未报道PIC在RA治疗中的应用。本实验旨在探讨PIC是否对RA具有治疗作用及其特定机制。
实验方法:在本研究中,我们评估了白皮杉醇对停止RA进展的影响,并研究了所涉及的分子靶点。我们将大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)作为大鼠RA的体外模型,以此检测PIC对于大鼠RA的治疗效果。本实验通过使用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测了PIC对于成纤维样滑膜细胞的相对细胞毒性作用强度。运用ELISA等方法检测并分析了IL-6和IL-1β在大鼠FLS中的相对表达量。使用免疫蛋白印迹法检测INOS、COX-2、MMP-3、MMP-13等蛋白在FLS中的表达水平的变化,与此同时检测分析了凋亡相关的蛋白Bax和Bcl-2等的相对表达水平的变化。对于NF-κB信号通路相关蛋白(p-P65、p-IκB、P65和IκB)和MAPK信号通路相关蛋白(p-JNK、JNK、p-ERK、ERK)在FLS中的相关变化,我们也运用了免疫蛋白印迹法进行检验。而关于MMP-13在FLS中的相对表达量我们还通过免疫荧光法检测。除此之外,我们还制作了大鼠类风湿关节炎的动物RA模型,并对关节组织进行免疫组织化学染色处理评估,并以此进一步验证了PIC对于动物RA的具体的疗效。
实验结果:在本实验中,我们证明了PIC可以明显减少由TNF-α诱导的大鼠FLS分泌IL-6、IL-1β等促炎因子的作用。PIC还在基因和蛋白质水平上抑制环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。同时,PIC还抑制了RA患者中高表达的MMP-3和MMP-13的表达。此外,我们还发现PIC可以在一定程度上抑制抑凋亡相关的蛋白Bcl-2的相对表达,并同时促进促凋亡相关的蛋白BAX的表达,从而诱导FLS凋亡。上述的实验结果产生的原因可能是因为PIC抑制了核转录因子κB(NF-κB)和MAPK通路的活化。除此之外,我们还制作了大鼠RA模型,在其体内亦观察到Pic的有益效果。
实验结论:PIC能够通过抑制NF-κB和MAPK信号通路的激活而调节RA中炎症介质及凋亡相关蛋白的表达,从而对RA起到治疗作用。
实验方法:在本研究中,我们评估了白皮杉醇对停止RA进展的影响,并研究了所涉及的分子靶点。我们将大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)作为大鼠RA的体外模型,以此检测PIC对于大鼠RA的治疗效果。本实验通过使用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测了PIC对于成纤维样滑膜细胞的相对细胞毒性作用强度。运用ELISA等方法检测并分析了IL-6和IL-1β在大鼠FLS中的相对表达量。使用免疫蛋白印迹法检测INOS、COX-2、MMP-3、MMP-13等蛋白在FLS中的表达水平的变化,与此同时检测分析了凋亡相关的蛋白Bax和Bcl-2等的相对表达水平的变化。对于NF-κB信号通路相关蛋白(p-P65、p-IκB、P65和IκB)和MAPK信号通路相关蛋白(p-JNK、JNK、p-ERK、ERK)在FLS中的相关变化,我们也运用了免疫蛋白印迹法进行检验。而关于MMP-13在FLS中的相对表达量我们还通过免疫荧光法检测。除此之外,我们还制作了大鼠类风湿关节炎的动物RA模型,并对关节组织进行免疫组织化学染色处理评估,并以此进一步验证了PIC对于动物RA的具体的疗效。
实验结果:在本实验中,我们证明了PIC可以明显减少由TNF-α诱导的大鼠FLS分泌IL-6、IL-1β等促炎因子的作用。PIC还在基因和蛋白质水平上抑制环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。同时,PIC还抑制了RA患者中高表达的MMP-3和MMP-13的表达。此外,我们还发现PIC可以在一定程度上抑制抑凋亡相关的蛋白Bcl-2的相对表达,并同时促进促凋亡相关的蛋白BAX的表达,从而诱导FLS凋亡。上述的实验结果产生的原因可能是因为PIC抑制了核转录因子κB(NF-κB)和MAPK通路的活化。除此之外,我们还制作了大鼠RA模型,在其体内亦观察到Pic的有益效果。
实验结论:PIC能够通过抑制NF-κB和MAPK信号通路的激活而调节RA中炎症介质及凋亡相关蛋白的表达,从而对RA起到治疗作用。