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灵芝酸是灵芝中除多糖外另一类具有广泛生理活性的物质,被证明具有止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、抗肿瘤等活性。因此如何利用液态发酵大量生产灵芝酸对扩大其应用范围具有极其重要的意义。本文以实现发酵法大量生产灵芝酸为目的,就灵芝酸的测定方法、发酵-工艺、分离提取、结构鉴定开展研究工作,主要研究结果如下:1.研究了灵芝酸的薄层层析定性检测方法,以甲苯:乙酸乙酯:乙酸（13:4:0.4）作为展层剂,用10%硫酸乙醇溶液显色,出现Rf 0.17,Rf 0.56,Rf 0.70三个斑点,且随着显色时间的增加,颜色由黄→红→紫→褐色,表明其为三萜类物质。建立了紫外分光光度法测灵芝酸含量的方法,标准曲线为C=（0.331×A254-0.004）×n,线性相关系数为0.9998,精密度实验、重复性实验和回收率实验的相对标准偏差分别为0.56%,3.6%,1.1%。表明此法准确可靠,且简便、快速。2.研究了溶解氧对灵芝酸发酵的影响。结果表明:前48 h调节摇床转速175 rpm,48 h至发酵结束调节摇床转速75 rpm的培养方式下生物量、胞外灵芝酸及胞内灵芝酸的产量较自然发酵分别提高10.8%,14.5%,23.5%,总灵芝酸平均生产强度（5.43 mg/L·h）比自然发酵条件下（4.50 mg/L·h）提高了20.7%;先摇床培养96 h后静置培养60 h的方式下生物量、胞外灵芝酸及胞内灵芝酸的产量较自然发酵分别提高4.6%、56.1%、30.7%,总灵芝酸平均生产强度（3.84 mg/L·h）比自然发酵条件下（4.50 mg/L·h）降低了14.7%.研究了pH值对灵芝酸发酵的影响,未控制pH发酵条件下,生物量最大值达到了11.14 g/L;控制恒定pH 4.5的发酵条件下,有利于灵芝酸的生成,总灵芝酸产量最大为538.01 mg/L。由此提出了两段pH控制策略:发酵前期pH不加控制,当pH降至4.5时,控制pH在4.5,应用此策略生物量、胞外及胞内灵芝酸的产量较自然发酵分别提高了6.8%、7.5%、3.4%.3.利用AB-8大孔吸附树脂提取分离发酵液中灵芝酸。实验结果表明上样的最佳条件为pH 2,流速为2 mL/min,此时AB-8树脂对灵芝酸的吸附量达8.837 mg/g。最佳洗脱方案为:水→20%乙醇→40%乙醇→95%乙醇。利用定性显色反应和薄板层析,鉴定了95%乙醇洗脱流分含有灵芝三萜类成分。大孔树脂95%乙醇洗脱组分经反相C-18柱和制备高效液相色谱分离,经HPLC检测分析,纯度达到92.5%.由其红外光谱,质谱和1H-NMR图谱分析,确定该化合物的分子量为470,推断其为赤芝酸F甲酯,其分子式为C28H38O6,其结构类型为Ⅳ型。4.利用单因子试验和响应面法优化了菌丝体中灵芝酸的提取工艺。结果表明在乙醇浓度为93.6%（v/v）、提取温度79.1°C、提取液固比42.2:1、提取次数2次、每次提取时间2 h的条件下,灵芝酸的提取率最高,为28.72 mg/g干菌丝。将提取得到的灵芝酸,经有机溶剂萃取、硅胶柱层析等分离纯化步骤,得到组分A和组分B,薄层层析检测,各有一个主要斑点,其Rf值分别为0.70、0.56。