论文部分内容阅读
第一部分:含p IRES-CEACAM6-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌对大鼠大肠癌生长的影响目的:研究减毒沙门氏菌(SL3261)为载体的CEACAM6联合4-1BBL基因疫苗对实验性大肠癌的抑制作用。方法:实验大鼠随机分四组,每组6只,连续18周皮下注射1,2-二甲肼以建立大鼠大肠癌模型,同时于第8、10、12及14周每组分别灌服p IRES/SL3261、p IRES-CEACAM6/SL3261、p IRES-4-1BBL/SL3261、p IRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261减毒沙门氏菌疫苗,浓度为109/ml的细菌2ml,第18周处死荷瘤大鼠,解剖并观察大鼠大肠成瘤数量,收集大鼠大肠及脾脏组织,病理HE染色并评判肠道肿瘤Dukes分期,RT-PCR检测大鼠脾脏细胞CMV基因。结果:p IRES/SL3261空质粒组平均成瘤数为11.7±2.1个,明显多于p IRES-4-1BBL/SL3261组(5.7±1.2个),p IRES-CEACAM6//SL3261组(5.0±1.4个),p IRES-CEACAM64-1BBL/SL3261组(4.3±1.4个);Dukes分期分析,p IRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261组5只为A期,1只为B-C期;p IRES-4-1BBL/SL3261组中3只为A期,3只为B-C期;p IRES-CEACAM6/SL3261中1只为A期,5只为B-C期;p IRES/SL3261组中4只为B-C期,2只为D期。RT-PCR检测各组脾脏均有CMV基因表达。结论:各组疫苗菌可以将外源基因有效转录至大鼠体内并表达相关蛋白,含外源基因的疫苗菌均能抑制实验性大肠癌的生长,以含双基因疫苗菌的抑癌作用最强。第二部分:含p IRES-CEACAM6-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌抑制大鼠大肠癌的机制研究——肿瘤局部免疫反应目的:通过研究肿瘤组织内局部免疫反应分析双基因疫苗抑制肿瘤生长机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测四组大肠肿瘤组织的CD3、CD4、CD8、CD56、CD45RO、Foxp3、CEACAM6、IL-4、IL-17并分别评测各组指标表达分值。结果:与p IRES/SL3261组相比,p IRES-4-1BBL/SL3261组与p IRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261组CD3、CD8+、CD56+、CD45RO表达明显增高(P<0.05),而IL-4、IL-17和FOXP3表达明显下调(P<0.05),另外,p IRES-CEACAM6/SL3261组CD45RO表达较p IRES/SL3261组明显增高(P<0.05)。结论:含有CEACAM6和4-1BBL双基因的重组减毒沙门氏菌可能通过提高CD3+CD8+T细胞和NK细胞的浸润,减少Foxp3细胞表达,促进Th1极化,抑制Th2及Th17极化,诱导特异与非特异性免疫,并打破免疫抑制微环境的机制来抑制肠道肿瘤。第三部分:含p IRES-CEACAM6-4-1BBL质粒减毒沙门氏菌抑制大鼠大肠癌的机制研究——全身免疫反应目的:通过研究脾脏组织免疫学指标分析双基因疫苗抑制肿瘤生长的机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测四组大肠肿瘤组织的IFN-γ、CD3、CD4、CD8、CD56、Foxp3、IL-4、IL-17并分别评测各组指标表达分值。结果:与p IRES/SL3261组相比,p IRES-4-1BBL/SL3261组与p IRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261组IFN-γ、CD3、CD8+、CD56+表达明显增高(P<0.05),而IL-4、IL-17和FOXP3表达明显下调(P<0.05),而各组CD4表达无明显差别(P>0.05)。结论:通过研究双基因疫苗的全身免疫反应,含有CEACAM6和4-1BBL双基因的重组减毒沙门氏菌可以刺激机体产生特异与非特异性的抗肿瘤免疫。