论文部分内容阅读
在真核生物中,小RNA具有修饰染色质,降解mRNA,抑制mRNA翻译,抑制转座子转位、抵御病毒侵袭等重要的调控作用。小RNA的发生与作用机制是在一系列小RNA发生蛋白的参与下完成的。本文以粘团专化型尖孢镰刀菌生理小种1号(FOX-A8)为代表,通过基因敲除三类主要的小RNA发生相关基因家族Dicer(Dcr1和Dcr2)、Argonaute(Agol和Ago2)及RNA dependent RNA polymerase (Rdrp1、Rdrp2和Rdrp3),比较基因敲除突变体(ΔDcr、ΔAgo、ΔRdrp)与野生型之间的生长表型及致病力的差异,探讨Dcr、Ago及Rdrp的基因功能,为揭示尖孢镰刀菌小RNA发生的分子遗传机制奠定理论基础。具体研究结果如下:1.Dcr2基因与菌丝生长发育明显相关,与野生型的菌丝相比较,ΔDcr2及ΔDcr1/2菌丝分支较多,但是对分生孢子的形态并无影响;ΔDcr1、ΔDcr2及ΔDcr1/2总生物量基本没有差异,但是突变体的菌丝量减少,而分生孢子量却较多,说明Dcr基因在菌丝的营养生长及发育繁殖之间起重要的调控作用;对甘蓝的侵染结果表明,敲除Dcr基因之后对尖孢镰刀菌的致病力并无明显的影响;2.Ago1基因与分生孢子形态发育相关,与野生型的分生孢子相比较,ΔAgol的分生孢子变成了类似于酵母细胞的圆形球体,大小为野生型分生孢子的二分之一左右,且在液体中能以类似芽殖酵母的繁殖方式进行繁殖;Ago2基因与菌丝发育有关,ΔAgo2的菌丝变得较细且分支增多;Agol基因与Ago2基因均抑制尖孢镰刀菌在生长早期产生分生孢子,促进菌丝的延伸生长;Ago基因对尖孢镰刀菌的致病力并无太大影响;3. Rdrp2及Rdrp3基因与分生孢子的形态及繁殖方式相关,与野生的分生孢子相比较,ARdrp2和ARdrp3的分生孢子变为枸杞状,大小为野生型分生孢子的十分之一左右,且能够以类似芽殖酵母的繁殖方式进行繁殖,另外还可以以一种类似于孢子囊的大型产孢器产生一系列小的枸杞状分生孢子的方式繁殖;Rdrp2和Rdrp3基因与菌丝发育有关,ΔRdr1、ΔRdrp2及ΔRdrp3的菌丝形态均发生了畸形,其中ΔRdrp2及ΔRdrp3的菌丝比野生型的菌丝分支增多;培养温度为14℃C和33℃C时,ΔRdrp1、ΔRdrp2及ΔRdrp3的生长速度较野生型缓慢;ΔRdrp1、ΔRdrp2及ΔRdrp3的分生孢子产量较野生型逐次增多,菌丝产量较野生型逐次减少,但是总生物量并没有发生变化;ΔRdrp1、ΔRdrp2及ΔRdrp3对甘蓝的致病力减弱,其中ARdrp2及ARdrp3对甘蓝的致病力减弱较明显,说明Rdrp基因与尖孢镰刀菌的致病力具有一定关系。总之,Dcr、Ago和Rdrp基因均在不同程度上影响了尖孢镰刀菌的生长发育,值得关注的是ΔAgo1、ΔRdrp2及ΔRdrp3的分生孢子形态发生了明显的变化,具体变化机理目前还不清楚,且未有相关类似的报道,还有待于进一步研究。