【摘 要】
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为研制安全有效的PRRSV、PCV2基因工程疫苗,本研究采用RT-PCR方法扩增了PRRSV主要免疫原性基因ORF3、ORF5。在此基础上构建了四个含有PRRSV主要结构蛋白基因ORF5、ORF3和猪IL
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为研制安全有效的PRRSV、PCV2基因工程疫苗,本研究采用RT-PCR方法扩增了PRRSV主要免疫原性基因ORF3、ORF5。在此基础上构建了四个含有PRRSV主要结构蛋白基因ORF5、ORF3和猪IL18基因的重组核酸疫苗质粒pVAX1-ORF5、pVIR-IL18-ORF5、pVAX1-ORF5-ORF3、pVIR-IL18-ORF5 -ORF3和一个重组鸡痘病毒rFPV-IL18-ORF5-ORF3。并构建了两个共表达PRRSV和PCV2免疫原性基因的二联核酸疫苗pIRES-ORF2-ORF5、pIRES- ORF2-ORF5-ORF3和两个二联重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5、rFPV-ORF2- ORF5-ORF3。Western-blotting、IFA、RT-PCR等检测结果表明,核酸疫苗和重组鸡痘病毒中的目的基因在真核细胞中得到正确表达。小鼠免疫试验结果表明,所构建的核酸疫苗和重组鸡痘病毒均能有效刺小鼠产生抗PRRSV和PCV2特异性体液免疫和细胞免疫反应。用PRRSV核酸疫苗pVIR-IL18-ORF5-ORF3和重组鸡痘病毒rFPV-IL18-ORF5-ORF3以及PRRSV-PCV2二联核酸疫苗pIRES-ORF2-ORF5-ORF3和重组鸡痘病毒rFPV-ORF2-ORF5-ORF3联合免疫猪,结果表明,核酸疫苗和重组鸡痘病毒均能诱导猪产生特异性的体液免疫和细胞免疫反应,其中以核酸疫苗首免,重组鸡痘病毒追加免疫效果最佳。
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