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随着长期以来青链霉素的使用导致细菌的耐药性日益增加,加之稀释液中抗生素也主要以添加青链霉素为主,致使绵羊精液稀释液的保存效果有所影响,针对这一突出问题。本研究通过筛选添加于昆仑Ⅰ号稀释液中恩诺沙星的最适添加浓度;检测绵羊精液中微生物的多样性及其药敏性;探究稀释液中添加不同抗生素低温保存绵羊精液对精子凋亡基因表达量的影响,以期达到长效低温保存绵羊精液的效果。1.为了检测绵羊精液中的微生物多样性及其对抗生素的敏感程度。本研究通过选取稀释浓度为5×、10×和100×精子悬浊液采用稀释涂布平板法涂布于麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、SS琼脂培养基、脑心浸出琼脂培养基、Baird-Parker琼脂培养基,进行细菌的分离纯化,再采取平板划线法对不同形态菌株进行分离纯化,并进行16s r RNA测序鉴定菌种,采取纸片扩散法进行药敏试验,选取抗生素分别为青霉素、链霉素和恩诺沙星。结果显示:共分离出39株菌株,去除不同培养基同一结果,分离出16株不同菌株,其中埃希氏菌属（Escherichia）、志贺氏菌属（Shigella）、葡萄球菌属（Staphylococcus）对精液品质影响较大。16株菌中对青霉素敏感的有3株,对青霉素耐药13株,16株菌皆对链霉素耐药,对恩诺沙星敏感的有4株,中敏的有4株,耐药的有8株,其中4株无抑菌圈产生。结果表明,绵羊精液中的微生物较为丰富,且恩诺沙星对大多数菌均有抑制效果。2.为了研究添加不同浓度恩诺沙星的昆仑Ⅰ号稀释液对低温保存绵羊精液效果的影响。本试验通过添加5组不同浓度(E0组:0μg/m L;E25组:25μg/m L;E50组:50μg/m L;E75组:75μg/m L;E100组:100μg/m L)的恩诺沙星于昆仑Ⅰ号稀释液中,以昆仑Ⅰ号稀释液（C组）作为对照组,对绵羊精液进行超长时间低温保存,在第0 d,2 d,4 d,6 d,8 d,10 d,12 d时对精子活力、顶体完整率及细菌数进行检测分析。结果显示:E75组稀释液低温保存绵羊精液精子活力从第8 d开始极显著高于其余5组（P＜0.01）,且在保存第12 d时精子活力是5组中最高的（50.67±1.16）%;E0组稀释液低温保存的绵羊精子活力从第2 d开始低于其余5组,第6 d开始极显著低于E50组、E75组和C组（P＜0.01）;E75组精子顶体完整率仅在第10 d显著高于其余5组（P＜0.05）,其他天数均与E25、E50、E100、C组差异不显著（P＞0.05）,而E0组精子顶体完整率从第6 d开始显著低于其余5组（P＜0.05）;E0组精液细菌数从第4 d开始极显著高于其余5组（P＜0.01）,但6组精液的细菌数均在国家标准范围内。由此可见,昆仑Ⅰ号稀释液中添加75μg/m L恩诺沙星低温保存绵羊精液效果较优,而添加50μg/m L恩诺沙星效果次之与昆仑Ⅰ号稀释液效果相当,三组均能达到长效保存绵羊精液的效果。3.为了检测添加不同抗生素对绵羊精子凋亡基因表达量的影响。本试验通过提取未添加抗生素昆仑Ⅰ号稀释液、添加75μg/m L恩诺沙星昆仑Ⅰ号稀释液和昆仑Ⅰ号稀释液低温保存绵羊精液第6 d精子RNA,采用q RT-PCR方法检测促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、TNF-α、P53以及凋亡抑制基因Bcl-2基因的表达量。结果发现:添加75μg/m L恩诺沙星昆仑Ⅰ号稀释液组和昆仑Ⅰ号稀释液组在一定程度上能够降低促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、TNF-α、P53的表达量,提高凋亡抑制基因Bcl-2基因的表达量,但两者间差异不显著（P＞0.05）。结果表明,稀释液中抗生素的添加会影响精子凋亡相关基因的表达。综上所述,通过精液品质检测、微生物多样性鉴定以及分子试验三方面验证,得出昆仑Ⅰ号稀释液中添加75μg/m L恩诺沙星效果最优,优于昆仑Ⅰ号稀释液保存效果,能对绵羊精液进行长效低温保存。本研究为绵羊精液稀释液的优化及精液的保存提供了一定的试验依据,并有助于促进绵羊养殖产业健康发展。