NEDD4(Neuronal precursor cell Expressed Developmentally Downregulated 4,神经前体细胞表达的发育下调基因4)蛋白质属于含HECT(Homologous to E6-AP C-Terminus)结构域的泛素E3酶,从酵母到人类高度保守,结构上主要包括N末端的C2结构域,2–4个WW结构域和C末端的HECT结构域,其底物往往含有PY模序(包括LPxY和PPxY)。NEDD4已报道底物包括PTEN、Rap2A、Cbl-b、Gag和NEaC等,生物学功能涉及T细胞成熟、神经发育、病毒出芽释放和膜受体的降解与内化等。本实验室前期工作应用质谱技术鉴定A20细胞中CD40信号复合物的新组分,其中包括NEDD4,而目前未有报道称NEDD4直接参与CD40相关通路的调控。因此,本课题研究了NEDD4在CD40引起的下游通路激活过程中所起的作用以及机制。在HEK293和A20细胞中,通过免疫共沉淀的方法发现NEDD4能与CD40通路的重要介导子TRAF3发生相互作用,但与TRAF2之间不存在相互作用,同时NEDD4能明显促进TRAF3的泛素化,而对TRAF2的泛素化则没有影响,提示NEDD4可能是TRAF3的泛素E3酶。通过比较对照细胞和过表达NEDD4的A20细胞,对照细胞和NEDD4瞬时干涉的A20细胞以及对照细胞和NEDD4基因敲除的na?ve B淋巴细胞,发现NEDD4在一定程度上影响CD40信号通路下游蛋白质p38的激活。由于NEDD4基因全身敲除的小鼠胚胎致死,为了能得到NEDD4基因敲除的B淋巴细胞,我们通过胎肝移植的方法重建受体小鼠的免疫系统,成功得到了胎肝嵌合体。分离嵌合体小鼠的na?ve B淋巴细胞,通过PI染色和CFSE染色测定细胞的死亡和增殖,发现NEDD4对细胞的存活和增殖没有影响。用CD43(Ly-48)MicroBeads负选na?ve B淋巴细胞时发现,NEDD4基因敲除的脾脏淋巴细胞中CD43阴性的细胞含量明显增加。提示NEDD4在B细胞的发育及激活过程中可能发挥一定作用。综上所述,本研究结果提示NEDD4通过影响TRAF3的泛素化参与CD40介导的p38的激活。