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中国明对虾是我国重要的海产养殖品种，它肉质鲜美，且营养丰富，备受消费者青睐。但随着集约化高密度养殖以及养殖规模的不断扩大，自上世纪90年代以来，对虾疾病频繁爆发，使海产养殖业遭受巨大损失。虽然国内外许多科研工作者在对虾疾病防治方面做了大量的工作，并且取得了可喜的进展，但由于对虾免疫防御机制的研究起步较晚，研究并不是很深入，所以迄今为止，对虾疾病仍然是困扰对虾养殖业的一大难题。目前对虾病的防治主要是通过口服疫苗、免疫增强剂等方法增强对虾的免疫力。其中应用的免疫增强剂，主要包括化学物质、细菌组分、多糖、动植物提取物、营养因子以及细胞分裂素等。不过要进一步解决对虾疾病传染问题除了改善对虾养殖环境、使用饲料添加剂、药物治疗外，更应该着重于提高其自身免疫力和抗病力，所以应该更深入的研究对虾中模式识别受体的种类和作用方式、对虾体液免疫中各个免疫因子和蛋白的作用方式等。本实验室一直从事对虾免疫相关的研究。为了研究对虾的免疫相关基因及免疫机制，本论文主要从对虾抗菌肽—抗脂多糖因子(Anti-lipopolysaccharide factor，ALF)着手，从其基因克隆到重组蛋白表达及其纯化，主要工作及结果如下：1．中国明对虾ALF基因克隆根据在其它相近物种所得ALF基因的保守区进行比对，设计了中国明对虾克隆ALF基因中间片段的兼并引物，通过多次试验成功探索到克隆ALF基因的最佳条件，并克隆到280 bp的片段，据测序结果分别设计了克隆ALF3’和5’端的引物，利用它们分别和3’锚定引物、5’PCR Primer组成一对引物，克隆到了ALF的3’和5’端，通过测序并拼接获得了中国明对虾ALF全长基因。2．重组表达载体的构建将已克隆到的中国明对虾ALF基因分别以pET-30a(+)和pGEX-4T-1为载体构建重组载体。3．ALF基因在大肠杆菌的表达将构建好的重组载体转化感受态的大肠杆菌BL21，对中国明对虾的ALF基因在原核中的表达进行了研究，并对其表达的蛋白进行纯化。在表达过程中成功解决了基因中含有大肠杆菌稀有密码子引起的表达量低的难题。为研究者在解决表达量低的问题上提供了理论和实践依据。从临床上来看，脂多糖与全身炎症反应综合症、内毒素休克、败血症发生有关，甚至可引起多器官功能障碍综合征，给人类健康带来严重威胁。ALF具有很强的结合脂多糖的特性，利用有活性的ALF来治疗和预防此类疾病将有良好的效果。此外，脂多糖是构成革兰氏阴性菌胞壁外膜的主要成分，ALF具有抗菌活性，作为抗菌肽在抗革兰氏阴性菌方面具有广阔前景。本论文的研究主要是针对中国明对虾ALF基因克隆和表达，为对虾疾病防治提供了一定的理论依据。本实验还需深入的工作是重组蛋白的抗菌活性研究以及在治疗人类疾病中的作用。