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昆虫神经毒素具有控制农业害虫的重要潜在价值,但天然昆虫神经毒素在毒腺中的含量低且提取困难。目前,已开发多种外源基因表达系统,如大肠杆菌表达系统和毕赤酵母表达系统,为大量获取这类神经毒素提供了有效的表达系统。大肠杆菌表达系统是使用最为广泛的一种原核表达系统,毕赤酵母表达系统是一种高效的真核表达系统,许多基因实现了在大肠杆菌表达系统和毕赤酵母表达系统中的高效表达。在不改变3种蝎神经毒素AaIT、BjαIT、LqhIT2和1种蜘蛛神经毒素TX(46-1)的蛋白质一级结构的基础上,按照毕赤酵母的密码子偏好性,设计合成了上述四种昆虫神经毒素,并分别克隆至大肠杆菌融合表达载体pET30a(+)和毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K。通过转化大肠杆菌,筛选到了四种昆虫神经毒素的大肠杆菌转化子;其中,三种蝎神经毒素实现了在大肠杆菌中的融合表达,表达产物经镍亲和层析柱纯化,并得到了高纯度融合蛋白;纯化蛋白经免疫注射BALB/c小鼠,制备了三种蝎昆虫神毒素的较高效价的抗血清;其中,AaIT的抗血清最高效价达1:128,000,BjαIT的抗血清最高效价达到1:512,000,LqhI2的抗血清最高效价超过1:128,000,所制备的抗血清均具有较高的特异性。通过提取免疫BjαIT融合蛋白小鼠的脾细胞总RNA,经RT-PCR,在连接肽的连接下,构建了包含抗昆虫神经毒素BjαIT的scFv全长DNA片段库。利用电转化法,四种毒素基因分别成功转化毕赤酵母KM71菌株。利用制备的抗血清,采用斑点杂交的方法,筛选到了较高水平表达的三种蝎昆虫神经毒素的酵母转化子。在甲醇诱导下,实现了AaIT、BjαIT和LqhIT2的分泌表达。表达产物经脱盐、浓缩,以东亚飞蝗和德国小蠊为供试昆虫,对表达产物的生物活性进行了测定。结果表明:三种重组蝎昆虫神经毒素具有体内注射活性。通过引入信号肽,成功将BjαIT基因、BjαIT自身信号肽基因及绿僵菌表达载体连接,构建了超表达载体。超表达载体经基因枪转化绿僵菌分生孢子,筛选到能在除草剂平板上生长的转化子。通过提取转化子基因组DNA,经PCR验证,BjαIT基因成功转化绿僵菌。