酪氨酸磷酸化蛋白质在精子细胞内呈区域性分布,精子细胞头部结构高度极化,其中精子顶体蛋白质酪氨酸磷酸化不仅与获能期间发生顶体反应有关,也与精卵结合并使精子穿过透明带的相互作用有关,蛋白质的酪氨酸磷酸化是参与精子获能、顶体反应以及精子超激活运动等过程的重要调控,是精子获能的一个重要标志。在猪精子头部顶体区,有一种分子质量约为32000的高度保守的蛋白,这种哺乳动物蛋白是经过其前体翻译并修饰而成,前体的相对分子质量约为61000,由于这种蛋白能够特异性的结合顶体素原(也称前顶体蛋白,proacrosin)和顶体素中间体,参与其转变为顶体素(也称顶体蛋白,acrosin)的过程,故被称为精子蛋白32(sperm protein32, sp32)。为了研究“获能样”精子无法真正获能的机理,因而从分子水平探究不同处理对猪精子顶体中温度依赖性酪氨酸磷酸化蛋白及前顶体蛋白激活蛋白sp32的影响。对不同处理(常温、冷冻解冻、获能、顶体反应前期、非获能液冷休克非获能液冷休克复温、获能液冷休克、获能液冷休克复温)的猪精子进行状态检测和考马斯亮蓝染色,并对顶体蛋白进行分离提取后进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测和分析。结果表明：1.四种处理(常温、获能、冷冻解冻、顶体反应前期)中,顶体反应前期处理组的sp32表达水平在四个处理组中最高,以后依次为获能、冷冻解冻和常温精子；2.对于常温、获能、顶体反应前期三个处理组进行比较,酪氨酸磷酸化sp35、sp38在本处理组顶体蛋白组分中表达水平逐渐上调；3.获能冷休克处理组中酪氨酸磷酸化sp40、sp55表达水平分别高于本组分中sp38、sp53,而在获能处理组中,这两组蛋白关系则完全相反；4.冷冻解冻精子五种顶体蛋白酪氨酸磷酸化水平相对关系与获能精子非常相似,但是冷冻解冻精子sp35的酪氨酸磷酸化呈现较高水平表达,与sp38非常接近。结论：1.sp32作为一种前顶体蛋白结合蛋白,在顶体蛋白活化过程中表达水平上调。2.酪氨酸磷酸化sp35、sp38伴随着猪精子获能和顶体反应过程而表达水平上调。3.由冷休克引起的低温损伤猪精子顶体蛋白中酪氨酸磷酸化sp38表达水平低于sp40,sp53表达水平低于sp55,而获能精子与之相反。推测酪氨酸磷酸化sp38和sp40、sp53和sp55的表达关系呈现出一定的特殊性,对猪精子获能和冷休克的比较研究提出一种参考。4.冷冻解冻精子酪氨酸磷酸化sp35的较高水平表达与其低温损伤机制有密切联系。综上所述,猪精子顶体酪氨酸磷酸化蛋白表达水平呈现一定规律,为猪精子活化和冷休克后续试验和深入研究提供一定的理论参考,尤其对猪精子冷休克损伤及损伤保护的研究有一定作用。通过本论文的研究,对深入探讨猪精子获能机理有一定的参考价值。