布鲁氏菌病是一种危害严重的人畜共患传染性疾病,其病原布鲁氏菌是一种胞内寄生菌,没有典型的毒力因子,目前致病机理并未完全阐明。因此,本试验通过筛选与布鲁氏菌毒力相关或与布鲁氏菌代谢途径相关的基因,在分子水平深入探索布鲁氏菌的致病机理。本项研究以实验室早期构建的羊种布鲁氏菌16M转座子突变株文库为基础,以生长特性为表型,通过突变菌株在基础培养基(TSA)和完全培养基(10%脾浸液/TSA)上菌落生长特性的差异进行筛选,共筛选了66块96孔板即6336株突变菌株,初次筛选出1127株,经三次重复后发现个别菌株三次筛选结果均不一致。将第二次筛选出的菌株共170株划线培养,挑取单菌落再次筛选,共筛选出三次结果一致的菌株：25株营养缺陷型菌株和2株对脾脏浸液敏感的菌株。将这27株突变株进行体外培养特性观察,同一突变菌株在完全培养基上的菌落比基础培养基多10’CFU,并且菌落直径也明显增加,其中V-8株液体培养时沉淀较多,经结晶紫染色法鉴定为粗糙型,其余均为光滑型布鲁氏菌；此外V-24和V-26株的培养时间与大多数菌株不同,经布鲁氏菌种型PCR鉴定后发现V-24非布鲁氏菌,V-26能够扩增出特异性条带,为布鲁氏菌。以鼠源巨噬细胞J744.A1为模型,选取23株筛选出的菌株进行细胞感染试验,结果显示V-5、V-8和V-14在巨噬细胞内繁殖复制能力均低于其母本野生型菌株16M。筛选出的27株突变菌株经过基因组酶切、连接、反向PCR后测序,其中10株测序成功。本项研究筛选了27株布鲁氏菌突变菌株,确定了转座子插入的基因,为寻找布鲁氏菌毒力相关基因或代谢相关基因奠定了基础。