论文部分内容阅读
柿叶是柿的新鲜或干燥叶片,其味苦,具有止血、抗癌等多种医疗保健功能,柿叶的主要有效成分是黄酮类化合物。酪氨酸酶抑制剂（Tyrosinase Inhibitor,TI）通过抑制酪氨酸酶活性从而抑制黑色素的生成。因此,TI可以降低食品褐变程度从而可以作为保鲜剂。本文的目的是对柿叶中的黄酮类化合物的制备工艺进行优化,并研究其对酪氨酸酶的抑制效果及其在果蔬保鲜中的应用。1采用纤维素酶法提取柿叶黄酮（PLF）,在单因素试验基础上选取试验因素与水平,根据中心组合（Box-Benhnken）试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,依据回归分析各影响因素。以PLF得率为响应值作响应面和等高线,得出柿叶黄酮提取的最佳工艺条件为:加酶量9mg,酶解温度52℃、pH4.8、酶解时间130min,在上述最优条件下,柿叶黄酮得率达2.47%。2实验表明AB-8树脂的对柿叶黄酮分离效果最好,实验所得的最佳工艺为:上柱液pH值6,上柱液流速2BV/h,样液浓度为3mg/mL,70%乙醇为洗脱液,洗脱液流速控制在2BV/h,洗脱液用量为3BV。经此条件纯化后,PLF提取物中黄酮含量由9%提高到34%。AB-8大孔树脂可以较好地分离纯化PLF。3用L-酪氨酸为底物,用紫外分光光度法测定PLF对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明,PLF对酪氨酸酶的抑制效果明显,其IC50值为2.38mg/mL,抑制作用属于可逆过程,其抑制类型为混合型,KI为0.33,KIS为0.48。4对PLF进行了抗氧化实验和络合Cu2+的实验。实验结果表明,PLF对DPPH·、超氧阴离子自由基(O2-·)和羟自由基（·OH）均有较好的清除率,对Cu2+有较强的络合能力。说明PLF对酪氨酸酶的抑制与其较强的抗氧化能力及其络合金属离子的能力有关。5以Vc含量、TSS含量和褐变度三个指标综合考察了PLF对鲜切苹果的保鲜效果。结果表明:PLF对鲜切苹果片具有一定的保鲜效果,当PLF浓度为0.1mg/m L,浸泡时间为5min时的保鲜效果最佳;PLF对鲜切苹果片的保鲜作用与其对酪氨酸酶的抑制和对多种自由基的清除作用有关,这可能是PLF对苹果片具有保鲜作用的机理之一。