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本研究分别将本实验室先后分离鉴定并保存的3株(HP09318株、HP080421株、HP081122株)鸭源禽呼肠孤病毒(Duck Reovirus, DRV)人工感染鸭胚和鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblast, DEF),运用细胞培养技术、光镜、电镜、RT-PCR, ELISA等多种研究方法,分别对感染鸭胚成纤维细胞后,病毒的增殖情况、细胞的病理变化、TNF-α表达水平进行系统的研究。人工感染鸭胚结果显示：3株DRV经绒毛尿囊膜途径接种于9-11d鸭胚,胚体在3-6d内全部死亡,胚体发育不良,个体偏小,全身皮肤出血,肝脏表面可见黄白色坏死点。3株DRV接种于DEF的病理变化：24h开始出现细胞病变,表现为细胞变圆,细胞内出现空泡,部分细胞发生溶解,48h病变加重,大量死亡细胞悬浮于培养基中,其中可以见到悬浮的巨细胞。细胞经H.E染色后,镜下可见细胞呈拉网状,部分细胞坏死,核碎裂,并且可见含有多个细胞核的巨细胞。在细胞质中观察到嗜酸性的包涵体颗粒。将细胞制作超薄切片,在透射电镜下观察,感染细胞出现大小不一的囊泡,可见板层样结构,细胞质中可观察到病毒颗粒。3株DRV在DEF中的增殖规律：在接种病毒后12h、24h、48h、72h和96h分别收集细胞、细胞培养夜以及两者的混合物,应用荧光定量RT-PCR方法检测病毒含量,结果显示,接毒后12h三者中病毒含量均较低；24h三者病毒含量都呈上升趋势,而且细胞与混合物中病毒含量最高；48h细胞与混合物中病毒含量相比24h下降,而细胞培养液中病毒含量达到最高；48h-96h三者病毒含量呈降低趋势。3株DRV病毒感染DEF后TNF-a含量变化：应用ELISA方法检测其蛋白水平,结果显示接种后12h对照组中TNF-a的含量高于接毒组,24h以后对照组与接毒组中TNF-a含量均呈增加趋势,且接毒组高于对照组,96h检测接毒组中TNF-a含量下降低于对照组；荧光定量RT-PCR方法检测其mRNA表达水平,结果显示DEF在接种DRV后48h～48hTNF-amRNA表达水平明显上调,96h后TNF-α基因表达水平下调。结果表明：本实验室分离保存的3株鸭源呼肠孤病毒可以在DEF中成功复制增殖,并致使细胞产生明显的病理变化,被感染细胞透射电镜下可观察到形态一致病毒颗粒。3株DRV感染细胞导致接毒组与对照组细胞中TNF-α表达水平存在明显差异,3株DRV感染DEF后,病毒的增殖、病毒所致细胞的病理变化与细胞中TNF-α表达水平三者之间呈正相关。