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目的:分析雪胆素甲(cucurbitacin IIa, CuIIa)对脂多糖(LPS)诱导活化的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法:MTS法检测CuIIa对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞增殖的影响,Transwell法检测CuIIa对巨噬细胞迁移的影响,SDS-聚丙酰胺凝胶电泳法检测CuIIa对细胞内骨架蛋白G-actin与F-actin的影响。细胞内细胞因子染色法检测CuIIa对LPS诱导活化的巨噬细胞炎症细胞因子TNF-分泌的影响。相差显微镜观察CuIIa对活化的巨噬细胞形态的影响,荧光显微镜观察Hoechst33342染色细胞后细胞核的形态,流式细胞仪检测细胞亚二倍体(凋亡)峰的变化,免疫印迹法检测细胞内MAPKs、NF-B、Caspase-3和LC3B-II相关蛋白的表达情况。荧光显微镜观察细胞内骨架蛋白Actin和自噬相关蛋白LC3B的分布。结果:CuIIa能明显抑制巨噬细胞RAW264.7细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性。CuIIa能显著抑制巨噬细胞迁移(P<0.05)。CuIIa作用细胞后,能诱导细胞发生Actin聚集,细胞内骨架蛋白G-actin聚集为F-actin聚集体。但是CuIIa并不能抑制LPS活化的巨噬细胞炎症因子TNF-的分泌(P>0.05)。同时CuIIa对LPS引起的细胞内MAPKs和NF-B炎症信号通路相关蛋白的活化作用均未有显著影响。CuIIa使LPS活化的伸展细胞收缩变圆,伪足突起消失,细胞核内染色质固缩,细胞核碎裂,细胞内发生严重的Actin聚集,说明微丝结构被破坏。随着CuIIa浓度的增加,其诱导LPS活化的RAW264.7细胞处于Sub-G0/G1(凋亡峰)的数量明显增加,但其单独作用于细胞不会有效诱导巨噬细胞发生凋亡。免疫印迹分析显示,这些效应是Caspase-3依赖的,并伴随着survivin的下调。同时, CuIIa可以增强LPS诱导的RAW264.7细胞自噬,自噬相关蛋白LC3B-II显著增加。荧光显微镜可以明显观察到LPS刺激后细胞内LC3B聚集成点状分布,CuIIa使这种点状LC3B的数量明显增加。结论:CuIIa能剂量依赖性抑制巨噬细胞RAW264.7细胞增殖与迁移,并诱导细胞内肌动蛋白细胞骨架发生聚集。虽然CuIIa不能有效的抑制巨噬细胞炎症细胞因子TNF-的分泌和炎症信号通路蛋白的活化,但其可以有效的诱导活化的巨噬细胞发生凋亡与细胞自噬。这些可能是其发挥抗炎效应的作用机制之一。