背景乙型肝炎是由HBV病毒感染引起的一种传染性疾病。机体在感染乙肝病毒后,可逐渐发展为肝炎、肝硬化、肝癌等一系列疾病。全世界有将近20亿人感染HBV,每年有将近100万人死于由慢性HBV感染而引起的肝硬化和肝癌。目前针对HBV的治疗使用的干扰素与核苷类似物类药物,都无法完全清除HBV病毒。因此,寻求更合理的治疗方法是我们面临的重要挑战。低密度脂蛋白受体LDLR是脂质代谢的重要受体,在肝脏中调控脂质代谢的稳定,而胆汁酸膜受体TGR5作为胆汁酸代谢的重要受体,在肝脏调节肝脏炎症与再生、胆汁分泌、细胞增殖和胆囊充盈。人体在感染HBV之后往往伴随着脂质代谢和胆汁酸代谢异常,但脂质与胆汁酸代谢的异常对于HBV复制、表达和清除的影响目前研究尚不清楚。本文以LDLR与TGR5为切入点,探索脂质和胆汁酸代谢在HBV感染中的作用,这将为乙型病毒性肝炎的治疗提供新的思路。目的研究脂质代谢和胆汁酸代谢异常对于HBV复制、表达和清除的影响,从而为乙型肝炎的治疗及预后提供理论依据。方法1.HBV感染对脂质代谢的影响。（1）HBV感染与人肝脏脂肪变相关性分析。收集HBV感染者肝组织石蜡切片及病历资料,HE染色与免疫组化HBsAg染色,分析HBV感染者肝脏中HBsAg与肝脏脂肪变性程度的关系;（2）HBV感染对人血清脂蛋白的影响。收集健康人与HBV感染者血清,快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography,FPLC）分离血清脂蛋白,分析HBV对VLDL-C、LDL-C和HDL-C影响;（3）HBV感染对小鼠脂代谢的影响。构建HBV感染小鼠模型,ELISA检测血清HBV表达情况;FPLC分离血清脂蛋白,分析HBV感染对小鼠VLDL-C、LDL-C和HDL-C的影响;提取小鼠肝组织mRNA,Real-Time PCR检测脂质代谢相关基因的表达情况;提取小鼠的肝脏蛋白,Western Blot对HMGCR与LDLR进行检测;（4）HBV感染对游离胆固醇及低密度脂蛋白摄取的影响。在HepG2细胞中转染pAAV与pAAV/HBV1.2质粒,加入荧光标记的NBD-cholesterol与Dil-LDL,检测HBV感染对游离胆固醇与低密度脂蛋白的摄取;2.LDLR^-/-对HBV复制、表达以及免疫应答的影响。构建HBV感染的C57BL/6和LDLR^-/-小鼠模型。（1）ELISA检测HBV小鼠血清和肝脏中HBsAg、HBeAg的表达及HBcAb的产生;（2）提取小鼠血清中的病毒DNA,Real-Time PCR定量检测血清中病毒DNA的含量;（3）免疫组化检测两组小鼠肝脏HBcAg的表达情况;（4）肝脏HE染色及血清转氨酶变化;3.HBV感染对胆汁酸代谢的影响。（1）HBV感染对小鼠胆汁酸代谢相关基因的影响。构建HBV感染小鼠模型,提取小鼠肝组织mRNA,Real-Time PCR检测胆汁酸代谢相关基因的表达情况;小鼠肝脏石蜡切片,通过免疫组织化学染色技术检测肝脏TGR5的表达情况;（2）HBV感染对人肝脏TGR5的影响。临床HBV感染与未感染病人肝脏石蜡切片,通过免疫组织化学染色技术检测肝脏TGR5的表达情况;4.TGR5对HBV复制、表达以及免疫应答的影响。（1）TGR5^-/-对HBV复制、表达以及免疫应答的影响。建立HBV感染的C57BL/6和TGR5^-/-小鼠模型。ELISA检测HBV小鼠血清HBsAg、HBeAg、HBcAb水平;再分别检测血清转氨酶与总胆汁酸变化;提取血清中的病毒DNA,Real-Time PCR定量检测血清中病毒DNA的含量;提取小鼠肝脏蛋白,ELISA检测HBsAg、HBeAg的表达情况;取小鼠肝脏组织石蜡切片,免疫组化检测两组小鼠肝脏HBcAg的表达情况;提取肝脏组织mRNA,Real-Time PCR检测I型干扰素的相关基因表达情况;HE染色,从形态学方面来观察小鼠肝脏损伤程度;（2）TGR5激动剂INT-777在细胞模型中对HBV病毒的影响。在HepG2细胞中,转染pAAV/HBV1.2和phTGR5两种质粒,24 h后,对照组加入DMSO,实验组加入TGR5激动剂INT-777,24 h后收集细胞的上清液,ELISA检测HBsAg和HBeAg的表达情况,并提取血清病毒DNA,Real-Time PCR定量检测血清中病毒DNA的含量;5.TGR5对I型干扰素产生的影响。取6-8周龄的C57BL/6和TGR5^-/-雄性小鼠,分两组,对照组腹腔注射PBS溶液,实验组腹腔注射干扰素诱导剂Poly（I:C）,24 h后采血,ELISA定量检测小鼠血清IFN-β水平。结果1.HBV感染对脂质代谢的影响。（1）通过对临床HBV感染者肝组织切片染色,HE染色结果进行0-5分的脂肪变性程度评分,免疫组化染色结果进行0-5分的HBsAg表达程度评分,以此分析HBV感染者肝脏中HBsAg与肝脏脂肪变性之间的关系。结果显示:HBV感染者肝脏中HBsAg与肝脏脂肪变性程度呈负相关（P=0.028）;（2）在健康人与HBV感染者血清中,FPLC检测结果显示,HBV感染者的血清VLDL-C与LDL-C升高,HDL-C下降;（3）在HBV感染的C57BL/6小鼠中:FPLC检测结果显示,血清LDL-C升高,HDL-C下降;在mRNA水平上,HMGCR、LDLR上调（P<0.05）;在蛋白水平上,HMGCR与LDLR的表达均明显升高（P<0.05）;（4）在HepG2细胞构建的HBV感染模型中,Real-Time PCR结果显示,HBV感染后LDLR与HMGCR表达上调（P<0.05）;免疫荧光结果显示,HBV感染后游离胆固醇的摄取无差异,而低密度脂蛋白的摄取明显下降。2.LDLR^-/-对HBV复制、表达以及免疫应答的影响。（1）ELISA检测结果显示,相对于C57BL/6小鼠,LDLR^-/-小鼠血清及肝脏中HBsAg、HBeAg的表达水平均下降,而HBcAb的表达水平上升（P<0.05）;（2）提取血清病毒DNA,Real-Time PCR检测显示LDLR^-/-小鼠血清病毒DNA含量低于C57BL/6小鼠（P<0.05）;（3）免疫组织化学染色结果显示,LDLR^-/-小鼠肝脏中HBcAg的表达明显低于C57BL/6小鼠;（4）肝脏HE染色显示,两组小鼠在HBV感染后形态学上并没有明显的差异;两组小鼠血清转氨酶升高,但无明显差异;3.HBV感染对胆汁酸代谢的影响。在HBV感染的C57BL/6小鼠中:mRNA水平上,CYP7A1、CYP27A1上调（P<0.05）,TGR5上调更加显著（P<0.01）,CYP8B1下调（P<0.05）;免疫组织化学染色结果显示,小鼠肝脏TGR5的表达升高,主要集中在小鼠肝组织的小胆管与肝窦周围,而临床病人感染前后肝脏TGR5的表达均较高,无明显差异;4.TGR5对HBV复制、表达以及免疫应答的影响。（1）在HBV感染小鼠模型中,ELISA检测结果显示,相对于C57BL/6小鼠,TGR5^-/-小鼠血清及肝脏中HBsAg、HBeAg的表达水平均上升,而HBcAb的表达水平下降（P<0.05）;免疫组织化学染色结果显示,TGR5^-/-小鼠肝脏中HBcAg的表达明显高于C57BL/6小鼠;提取的血清病毒DNA,Real-Time PCR检测显示TGR5^-/-小鼠血清病毒DNA含量高于C57BL/6小鼠（P<0.05）;肝脏HE染色显示,两组小鼠在HBV感染后形态学上并没有明显的差异;C57BL/6与TGR5^-/-小鼠尾注后血清转氨酶与胆汁酸均升高明显,但无明显差异;（2）在HepG2细胞构建的HBV感染模型中加入TGR5激动剂INT-777后,细胞上清ELISA检测结果显示,INT-777抑制了HBsAg的表达（P<0.01）;Real-Time PCR结果显示,加入INT-777后,病毒DNA含量下降（P<0.05）;5.TGR5对I型干扰素产生的影响。C57BL/6和TGR5^-/-小鼠在注射Poly（I:C）后,C57BL/6小鼠血清IFN-β水平明显高于TGR5^-/-小鼠（P<0.05）。结论1.HBV感染干扰LDLR的功能,引起血清VLDL-C和LDL-C升高,HDL-C下降;2.LDLR敲除能够抑制HBV病毒的复制与表达,促进病毒的清除;3.TGR5的激活能够抑制HBV病毒的表达,促进病毒的清除。