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黄淮海地区是我国重要的小麦种植区。病毒病尤其土传花叶病和绿矮病是危害小麦最严重的病害之一。在黄淮海地区引起土传花叶病的病原为小麦黄花叶病毒(Wheatyellow mosaic virus，WYMV)和中国小麦花叶病毒（Chinese wheat mosaic virus，CWMV），这两种病毒都通过禾谷多黏菌（Polymyxa graminisL.）传播。引起绿矮病的病原为水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV)，主要通过灰飞虱（Laode lphaxstriatellus）传播。 植物病毒的快速检测对病毒病原鉴定、病害预警及防治起重要作用，同时研究病毒病的流行、病毒的变异及进化趋势对了解病毒病发生规律、病毒致病机理研究及抗病品种培育有重要意义。 本研究以多重RT-PCR为基础，选取危害山东小麦的WYMV、CWMV和RBSDVCP基因设计特异性引物，以Actin为内参基因，建立了一套同步检测WYMV、CWMV和RBSDV的方法。同时，对检测体系进行优化，PCR反应体系主要参数最终确定为TaqDNA聚合酶浓度0.025 U/μL，dNTP浓度0.25 mmol/L;扩增条件最终选择:退火温度56℃，延伸时间60 s，循环次数30次。 2013-2014年，对山东省17地市小麦病毒病发生情况调查后发现，在济南、东营、菏泽、莱芜和德州5地市未发现疑似样品，其余12地市共采集到165份样品。通过多重RT-PCR检测三种病毒的发生情况，结果表明:93份样品中含有WYMV，14份样品中含有CWMV，11份样品中含有RBSDV。WYMV主要分布在淄博、枣庄、泰安、烟台、济宁、日照、临沂、聊城及威海。首次在淄博、日照和聊城检测到WYMV。CWMV在烟台、威海等老病区发生严重，并且已经扩展到临沂地区。RBSDV在济宁和临沂地区有发生。烟台、威海和临沂存在WYMV和CWMV复合侵染，其中烟台和临沂以WYMV为主，威海以CWMV为主。济宁和临沂存在WYMV和RBSDV复合侵染，但均以WYMV为主。青岛、滨州和潍坊未检测到这三种病毒。 为研究小麦黄花叶病毒的遗传多样性，本研究共获得17个WYMV分离物全基因组序列。序列分析发现:除去ploy(A)，各分离物的RNA1均为7635 nt，开放阅读框(ORF)为7215 nt，编码2404个氨基酸;RNA2均为3651 nt，ORF为2712 nt，编码903个氨基酸。利用重组分析软件RDP分析发现分离物LY-1、LY-2、LY-3及LY-4的RNA1序列存在重组，Yamato、Yangzhou及本研究获得的QF-2、LY-2分离物的RNA2序列存在重组。依据WYMV RNA1和RNA2编码序列进行系统进化分析发现WYMV可分为两个组，日本Date和Kyowa分离物、中国Yaan和Zhouzhi分离物及TA-2、LY-6、QF-4、LY-5分离物的RNA1归属于Ⅱ组，但日本的Date和Kyowa分离物、中国Zhouzhi分离物及TA-2分离物的RNA2归属于Ⅰ组中;与这些分离物不同的是，RZ分离物的RNA1在Ⅰ组，但RNA2在Ⅱ组。这表明分离物Date、Kyowa、Zhouzhi、TA-2及RZ可能存在基因组重排。