论文部分内容阅读
目的:支气管哮喘是以哮喘个体气道慢性炎症过程为主要特征,由免疫反应所致的支气管疾患。哮喘的炎症与气道粘膜内T淋巴细胞过度活化有关,在过敏性哮喘,活化的T淋巴细胞以Th2细胞为主。Th细胞与支气管哮喘慢性气道炎症的发生和发展密切相关。本研究通过观察哮喘模型大鼠淋巴液、支气管肺泡灌洗液、血浆中Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-12)与Th2类细胞因子(IL-4)的动态变化,探讨T淋巴细胞增殖和分化在气道炎症发生过程淋巴液中的变化,以及这种变化与支气管肺泡灌洗液、血浆之间的关系。研究淋巴液在机体免疫调节中的作用,进一步阐明哮喘的免疫学发病机制,寻求哮喘防治的新方法。方法:建立哮喘大鼠模型,通过ELISA方法检测,观察卵白蛋白致敏激发大鼠淋巴液、支气管肺泡灌洗液及血浆IL-4、IFN-γ、IL-12水平在激发前0h、激发后2h、6h、10h、24h、48h的动态变化,以及三种细胞因子在这三者之间表达的相互联系。结果:1.本实验建立了经临床、病理、BALF分类计数证实的支气管哮喘大鼠淋巴液引流实验模型,成功采集了淋巴液。2.对照组大鼠淋巴液、BALF、血浆不同时间点IL-4、IFN-γ、IL-12水平的分布特点。1)淋巴液、BALF、血浆IL-4的平均浓度分别为13.21±1.52、8.44±1.22、5.72±1.16(pg/ml);IFN-γ为94.30±10.41、74.21±8.73、44.17±4.69(pg/ml);IL-12为22.81±2.15、15.77±1.26、8.04±1.06(pg/ml)。各时间点这三种细胞因子水平无显著性差异(P＞0.05)。2)在0h、2h、6h、10h、24h、48h各时间点淋巴液IL-4、IFN-γ、IL-12水平均较BALF、血浆明显升高(P＜0.01);BALF中IL-4、IFN-γ、IL-12水平在0h、2h、6h、10h、24h、48h各时间点均较血浆明显升高(P＜0.05)。淋巴液IL-4、IFN-γ、IL-12平均水平分别为BALF的1.6倍、1.3倍、1.4倍,血浆的2.3倍、2.1倍、2.8倍。3.哮喘组大鼠淋巴液、BALF、血浆不同时间点IL-4、IFN-γ、IL-12水平的对比研究。1)淋巴液、BALF、血浆IL-4平均浓度分别为31.99±6.31、22.42±2.45、17.42±4.36(pg/ml);IFN-γ为57.80±12.93、42.57±9.92、19.08±6.17(pg/ml);IL-12为10.53±4.01、4.61±0.97、3.14±0.84(pg/ml)。2)淋巴液IL-4、IFN-γ、IL-12水平激发后2h、6h、10h、24h、48h时间点均较0h明显升高(P＜0.05)。淋巴液IL-4水平于激发后2h开始升高,10h达高峰;BALF、血浆IL-4水平于激发后2h开始升高,24h达高峰。淋巴液IFN-γ、IL-12水平于激发后2h开始升高,6h达高峰;BALF、血浆IFN-γ、IL-12水平于激发后2h开始升高,10h达高峰。3)淋巴液IL-4水平较BALF、血浆在0h、2h、6h、10h、24h时间点明显升高,差异有显著性(P＜0.05);淋巴液IFN-γ、IL-12水平较BALF、血浆在0h、2h、6h、10h时间点明显升高,差异有显著性(P＜0.05)。淋巴液IL-4、IFN-γ、IL-12平均水平为BALF的1.4倍、1.4倍、2.3倍,血浆的1.8倍、3.0倍、3.3倍;BALF中IL-4、IFN-γ、IL-12平均水平为血浆的1.3倍、2.2倍、1.5倍。4)哮喘组大鼠在0h、2h、6h、10h、24h、48h各时间点淋巴液、BALF、血浆IL-4水平较对照组明显升高(P＜0.01),分别高出对照组2.4倍、2.7倍、3.0倍;IFN-γ、IL-12水平均较对照组明显降低(P＜0.01),IFN-γ分别低于对照组1.6倍、1.7倍、2.3倍;IL-12分别低于对照组2.2倍、3.4倍、2.6倍。结论:1.建立了哮喘大鼠淋巴液引流的实验模型,通过临床、病理及BALF分类计数证明模型制作成功。同时,在他人研究的基础上改进了大鼠淋巴液的采集方法。2.探讨了对照组大鼠淋巴液、BALF、血浆0h、2h、6h、10h、24h、48h各时间点IL-4、IFN-γ、IL-12水平的分布特点。结果显示IL-4、IFN-γ、IL-12在淋巴液、BALF、血浆中水平由高到低,依次递减。这表明淋巴液是细胞因子分布最集中的区域。提示检测淋巴液中细胞因子水平是反映机体免疫反应和炎症程度的敏感指标之一。3.对比研究了哮喘大鼠淋巴液、BALF、血浆0h、2h、6h、10h、24h、48h各时间点IL-4、IFN-γ、IL-12的水平。结果显示哮喘淋巴液中存在显著的Th1/Th2失衡。哮喘组大鼠淋巴液、BALF、血浆IL-4水平较对照组显著升高,而淋巴液IFN-γ、IL-12水平较对照组明显降低。哮喘组大鼠淋巴液中IL-4、IFN-γ、IL-12水平均高于其BALF和血浆水平,上述三种细胞因子浓度在淋巴液、BALF、血浆中由高到低,依次递减。哮喘大鼠淋巴液中IL-4、IFN-γ、IL-12三种细胞因子出现高峰均早于BALF、血浆;且存在明显时相变化。提示哮喘发病时细胞因子的紊乱可能最早来源于淋巴系统。推测检测哮喘淋巴液中细胞因子水平能更早、更准确地反映哮喘炎症反应程度。