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一、产果胶酶菌株的筛选从烟叶中分离到9株产果胶酶菌株,通过测定酶活和不同pH值下果胶酶的稳定性,筛选到一株高产果胶酶菌株,通过16SrDNA测序测定及序列比对,鉴定为Bacillus subtilis。通过测定该菌株的产酶曲线,发现该菌在培养16h时酶活最高,且最适pH为10,为碱性果胶酶。同时还测定了该菌的酶系组成,发现该菌有较高的淀粉酶酶活,酶活为45U/mL二、培养基的优化和碱性果胶酶的纯化通过优化产果胶酶培养基的氮源、碳源和无机盐离子,确定最终的培养基配方为1%(v/v)豆饼,10%(v/v)麦芽汁不(?)0.3%(v/v) CaCl2,将果胶酶酶活提高了9倍,达到690U/mL,这么高的酶活和经济的培养基为工业应用提供了可能。为了探索酶的特性,通过离子交换层析分离到了纯度较高的果胶酶蛋白组分,SDS-PAGE分析,该酶的分子量约为44kD。三、利用表面展示系统表达癌胚抗原乳酸菌是一类可发酵可溶性碳源的革兰氏阳性菌,因为其食品安全级的地位,使其成为了很好的疫苗载体,其中乳酸乳球菌是乳酸菌的模式菌。本论文中,利用Lactobacillus crispatus K2-4-3的S层蛋白的C端序列(LcsB)作为细胞壁的锚定域,构建了乳酸乳球菌的表面展示系统。为了验证这种表面展示系统作为口服疫苗的潜在应用,将癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)与靶向表面展示系统锚定域连接后,利用SDS-PAGE和Western blot分析,证实了CEA被成功地展示到乳酸乳球菌细胞表面。将获得的胞内表达和表面展示CEA的重组Lactococcus lactis NZ9000作为口服疫苗,灌胃BALB/c小鼠,通过MTT实验和ELISA结果,发现表面展示的CEA能诱导肠液sIgA抗体反应,但是不能诱导血清中IgG抗体。