猫泛白细胞减少症是由猫细小病毒(FPV)引起的一种高度接触性急性传染病,以高热、呕吐、腹泻、脱水、白细胞严重减少和出血性肠炎为特征,是猫科动物最重要的传染病。FPV不但能引起猫、水貂、浣熊等动物很高的发病率和死亡率,而且该病对各种野生动物和特种经济动物构成极大的威胁。因此,建立一种快速、准确、特异和灵敏的诊断方法势在必行。本实验利用PEG6000沉淀和差速离心法从细胞培养物中纯化FPV,成功制备了免疫抗原。采用常规免疫和脾内免疫相结合的方法,免疫雌性BALB/c小鼠。将免疫后血清效价达到1:10000以上的BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞进行融合、筛选和亚克隆,共获得能稳定分泌抗FPV单克隆抗体的杂交瘤细胞两株,分别命名为5G9、1A2。对所得McAb的效价、特异性等进行鉴定,结果表明:其中5G9和1A2都为IgG1亚型;染色体分析显示平均约为96对;细胞上清效价分别为10×29、10×27;腹水效价分别为100×28、100×26;两株McAb可能是针对FPV、CPV和MEV相同抗原决定簇的McAb,是群特异性McAb。用HRP标记1A2株McAb后,与5G9株细胞分泌的McAb建立双抗夹心ELISA检测方法,对抗体的包被浓度与时间、抗原稀释度、酶标二抗浓度与反应时间、封闭液及封闭时间、底物作用时间等一系列条件进行探索与优化,初步建立了FPV的双抗夹心ELISA检测方法,为下一步研制开发用于FPV检测的诊断试剂盒奠定基础。