【摘 要】
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橡胶树乳管细胞中的橡胶粒子根据发育程度的不同,主要可分为小橡胶粒子和大橡胶粒子。研究证明,大小橡胶粒子具有不同的橡胶生物合成速率,即小橡胶粒子具有较强的橡胶生物合成能力,而大橡胶粒子的橡胶生物合成则几乎停止,目前尚不清楚橡胶树大小橡胶粒子之间橡胶生物合成速率发生变化的分子机制。由于橡胶粒子蛋白是橡胶生物合成的关键酶或蛋白调控因子,因此,大小橡胶粒子之间橡胶生物合成速率发生变化的原因可能在于它们的蛋
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橡胶树乳管细胞中的橡胶粒子根据发育程度的不同,主要可分为小橡胶粒子和大橡胶粒子。研究证明,大小橡胶粒子具有不同的橡胶生物合成速率,即小橡胶粒子具有较强的橡胶生物合成能力,而大橡胶粒子的橡胶生物合成则几乎停止,目前尚不清楚橡胶树大小橡胶粒子之间橡胶生物合成速率发生变化的分子机制。由于橡胶粒子蛋白是橡胶生物合成的关键酶或蛋白调控因子,因此,大小橡胶粒子之间橡胶生物合成速率发生变化的原因可能在于它们的蛋白质表达发生了改变。迄今为止,尚没有大小橡胶粒子差异表达蛋白质组学方面的相关研究与报道。本研究首先建立了橡胶树大小橡胶粒子的差速离心分离技术,然后采用荧光双向差异凝胶电泳（2D-DIGE）与质谱分析方法对大小橡胶粒子的差异表达蛋白进行鉴定,研究结果将有助于揭示大小橡胶粒子蛋白质组份的变化与橡胶生物合成之间的关系、阐明橡胶生物合成的分子机理,并将为橡胶树分子选育种研究提供理论依据。主要研究结果及结论如下:1、建立了橡胶树大小橡胶粒子的差速离心分离方法,可以从胶乳中分离出纯净的大小橡胶粒子;2、SDS-PAGE研究表明,橡胶树大小橡胶粒子的蛋白谱带之间表现出一定程度的差异,如分子量为24.5 kDa的小橡胶粒子蛋白（SRPP）,只存在于小橡胶粒子和未经分离的总橡胶粒子中,而在大橡胶粒子则几乎不表达SRPP;此外,大小橡胶粒子在分子量约为22 kDa、35 kDa、50 kDa、80 kDa以及120 kDa等蛋白的表达上也存在表达量上的差异;3、橡胶粒子蛋白经2D-DIGE分离后,用DeCyder 6.5软件进行差异表达蛋白点的分析,共筛选出具有统计学意义（T≤0.05）并且差异倍数大于5.0的大小橡胶粒子差异表达蛋白点共100个,经MADE-TOF/TOF质谱分析得到鉴定的差异蛋白点为68个,其中在小橡胶粒子中上调表达的蛋白点26个,它们包括SRPP、REF、烯醇脢、肌动蛋白、热休克蛋白（HSC70）、乙烯反应因子2、真核细胞翻译起始起始因子5A、磷脂酶Da3（PLDALPHA3）、羟甲基戊二酰辅酶A合酶（HMGCS）、成熟酶K和胶乳过敏原等橡胶粒子蛋白;在大橡胶粒子中上调表达的蛋白点42个,它们包括REF（14.7 KDa）、REF（19.6 KDa）、磷酸甘油酸转运家族蛋白、β-1.3-葡聚糖酶和ASR蛋白等橡胶粒子蛋白。
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