随着现代社会节奏加快,压力加大,生殖疾病已经成为了困扰人类的严重疾病。其中,对于女性来说,卵巢早衰(POF)会造成女性患不孕症。并且卵巢早衰的发病几率随着女性年龄的增加也在不断上涨,在20岁以下的年轻女性当中,卵巢早衰的发病几率为1/10000,当女性年龄到达30岁时,卵巢早衰的发病几率上升至1/1000。而当女性的年龄达到40岁时,卵巢早衰的发病几率则达到1%。一旦造成不孕,女性的生殖能力是无法恢复的。并且到现在为止并没有特别有效的治疗方法。而随着生殖干细胞被发现以及培养技术的成熟,生殖干细胞移植成为了一种尝试治疗的方法。由于小鼠繁殖周期短并且易于操作,因此选用小鼠作为模型动物,通过原核注射的方法获得昆明系转pSohlh2-Tet3G-TRE3 G-Flag-DTA转基因小鼠。在启动子Sohlh2的作用下通过强力霉素(Dox)诱导Tet-on系统表达白喉毒素A(DTA),从而能够达到特异性的去除生殖细胞的效果。首先对转基因小鼠进行扩繁,并且通过测交方法得到纯合转基因小鼠后,对雌性小鼠进行药物诱导,发现在母鼠怀孕前两周喂DOX,可以在后代小鼠中达到最好的生殖细胞清除效果。平行对照实验组为野生型昆明鼠。诱导8周后,取雌性小鼠的卵巢制作石蜡切片,在200 X显微镜下进行形态学观察,发现原始卵泡被清除的情况明显,为了确定这一现象,对雌性诱导转基因小鼠以及对照组野生型雌性小鼠的卵巢进行了卵泡计数实验,对各个阶段的卵泡数量进行统计分析,得出结论为实验组转基因雌性小鼠以及对照组野生型雌性小鼠卵巢中的原始卵泡差异为极显著。为了进一步检测目的蛋白在小鼠卵巢中的表达位置,我们使用冰冻切片做DTA和rtTA两个基因的原位杂交实验。原位杂交实验结果表明DTA以及rtTA两个基因主要在卵巢皮质部分表达。和卵泡计数实验得到的结果吻合。为了检测转基因小鼠的生长情况,我们取15只6周龄雌性转基因小鼠和野生型小鼠,对它们进行体重检测。结果表明转基因雌性小鼠和野生型雌性小鼠的体重并无显著性差异,因此转入基因对于小鼠的生长情况干预不大。随后对转基因小鼠和野生型小鼠的发情周期进行检测,检测发情周期中各个阶段持续的时间。实验结果表明转基因雌性小鼠的发情周期和野生型雌性小鼠的发情周期并无显著性差异,但是野生性小鼠放发情周期各个阶段的过度要更加平稳。综上所述,本实验通过对转基因雌性小鼠以及野生型雌性小鼠卵巢形态,卵泡数量,发情周期以及原位杂交实验的检测,证明了转基因雌性小鼠卵巢中的原始卵泡清空的效果明显,为之后的实验研究奠定了基础。