马兜铃酸Ⅰ和T-2毒素的免疫层析快速检测试纸条的研制

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马兜铃酸I(AA-I)和T-2毒素(T-2)是具有致癌性和细胞毒性等危害的小分子毒素。AA-I主要存在于马兜铃和细辛等中草药中,T-2毒素主要污染小麦和玉米等谷物粮食。检测中草药中的AA-I、谷物中的T-2毒素对保护人们的健康具有重要意义。目前常用液相色谱等大型仪器的方法检测AA-I、T-2毒素,这类方法往往需要专业人员操作,并且耗时较长。免疫层析试纸条具有特异性高以及耗时短的优点,而基于传统纳米金的试纸条对检测AAI、T-2毒素的灵敏度有限。因此,使用信号放大法以及纳米硒标记法研制免疫层析试纸条(ICS),以提高检测中草药中的AA-I和谷物中的T-2毒素试纸条的灵敏度。首先,通过柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制备了不同粒径的球形纳米金,选择了20 nm和30 nm两种粒径纳米金组合的方法,将较小粒径(20 nm)的纳米金标记单克隆抗体,较大粒径(30 nm)的纳米金标记羊抗鼠二抗,通过二抗与单抗的结合,连接两种金标抗体,建立信号放大模式,并以此为基础对快速检测AA-I和T-2毒素的信号放大免疫层析试纸条的工艺参数进行优化,制备出了检测灵敏度均为1 ng/m L的AA-I和T-2信号放大免疫层析试纸条,两种试纸条的检测时间均为10 min。其次,在PEG和SDS作稳定剂的条件下,通过维生素C还原亚硒酸,成功合成了球状的、均一分散且稳定的纳米硒粒子,并将纳米硒作为显色材料,标记单克隆抗体,制备出灵敏度为0.25 ng/m L的快速检测T-2毒素的纳米硒免疫层析试纸条,该试纸条在10 min内即可完成检测。此外,对制备的试纸条进行了特异性和稳定性的性能评价。三种免疫层析试纸条均不与马兜铃酸II(AA-II)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)等小分子毒素发生交叉反应,并在37℃保存2周或25℃恒温保存3个月后,仍具有与新制备试纸条相当的稳定性,说明所制备试纸条的特异性和稳定性良好。最后,分别采用信号放大免疫层析试纸条和纳米硒免疫层析试纸条对20个中草药样品和24个谷物样品中的AA-I和T-2毒素进行快速检测,并用HPLC以及ELISA法进行验证。结果表明,各方法在实际样品的AA-I和T-2毒素的检测中所得结果基本一致。因此,AA-I、T-2毒素的信号放大免疫层析试纸条和T-2毒素的纳米硒免疫层析试纸条均可用于实际样品的检测分析中。
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