降解PBS菌株的选育及其解聚酶的研究

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聚丁二酸丁二醇酯(PBS)于20世纪90年代进入材料研究领域,并迅速成为生物降解塑料研究热点。其合成原料来源既可以是石油资源,也可以通过生物资源发酵得到,PBS生物全降解塑料用途广泛,可用于包装、餐具、化妆品瓶及药品瓶、一次性医疗用品、农用薄膜、农药及化肥缓释材料、生物医用高分子材料等领域。与其它生物降解塑料相比,PBS在热性能、加工性能和性价比方面有独特的优势,因此引起科技和产业界高度关注。本项工作的目的是从自然界中筛选出可降解PBS的菌株,并对降解菌株进行驯化、诱变,使其高效降解PBS,并分离纯化出PBS解聚酶,研究其酶学性质,为PBS的应用奠定基础。本论文的主要结果如下:1.由抚顺石油三厂排出的污泥中筛选出可降解PBS的四株霉菌,分别为XH0501、XH0502、XH0503、XH0504。对其中一种降解速率较快的真菌XH0501进行初步鉴定:XH0501属于真菌门、子囊菌纲、真子囊菌亚纲、曲霉目、曲霉科、杂色曲霉。2.以XH0501为出发菌株,通过紫外线复合氯化锂诱变及微波诱变,采用摇瓶培养测定发酵液酶活力的复筛方法,获得具有遗传稳定性的PBS降解菌株,编号为XH0501-a,测得该菌株的酶活高于原始出发菌株的38.89%。3.对XH0501-a菌株产生的PBS解聚酶进行了分离、纯化,并对其解聚酶的特性进行了研究。纯化倍数约为12.26,酶活力回收率12.07%,酶蛋白的相对分子质量约为44.7kD。4.酶最适反应温度和pH分别为40℃和8.6。在温度30℃以下和pH8.0~9.4范围内稳定。金属离子Ca2+、Fe2+对PBS解聚酶有激活作用,而Cu2+、Hg2+等金属离子对此酶有抑制作用。5.质谱仪测得酶降解PBS的产物均为单体,即丁二酸丁二醇酯。6.扫描电镜观察降解后的PBS膜,结果表明PBS膜在没有降解之前,膜表面是光滑平整的,降解后膜表面能明显看到蜂窝状孔洞。
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