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[目的]验证vIL-10通过NF-κB通路抑制MHC-I类分子抗原加工和提呈的“操纵子”表达。[方法]1.将NF-κB p65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid(购于santa cruz)质粒转染人鼻咽癌低分化细胞CNE-2,以未转染荧光质粒的CNE2细胞作为对照,用流式分析仪分选出转染NF-κB p65 CRISPR/Cas9 KO Plasmid的细胞(带绿色荧光)。将挑选出的带绿色荧光的单细胞克隆培养后收集,Western blot检测单克隆中NF-κB p65的敲除情况,并建立NF-κB p65稳定敲除细胞株.RT-PCR、Western blot分别检测TAP1、 2, LMP2、7, HLA-ImRNA和蛋白质的表达情况。2.设计与构建BCRF-1的过表达载体。将PCMV-N-Flag质粒以及构建好的PCMV-N-Flag-BCRF质粒分别转染CNE-2细胞株和稳定敲除NF-κB p65的CNE-2细胞株。RT-PCR、Western blot分别检测TAP1、2, LMP2、7, HLA-I mRNA和蛋白质的表达情况。3.①将CNE2组(未处理组)设为A组；②将CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组)设为B组；③将CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组)设为C组；④将CNE2-NF-KB-KO组(敲除NF-κB组)设为D组：⑤将CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag组(敲除NF-κB空载体组)设为E组：⑥将CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组)设为F组。[结果]1.mRNA水平上：①TAP-1和TAP-2:CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中TAP-1、TAP-2 mRNA的表达较CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组,即B组)中的表达无明显变化(P>0.05)；CNE2-NFκB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组,即F组)中TAP-1、AP-2mRNA的表达较CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中的表达明显降低(P<0.05)。②LMP-2和LMP-7:CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中LMP-2、LMP-7 mRNA的表达较CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组,即B组)中的表达无明显变化(P>0.05)；CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组,即F组)中LMP-2、LMP-7 mRNA的表达较CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中的表达明显降低(P<0.05)。(DHLA-I:CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中HLA-I mRNA的表达较CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组,即B组)中的表达无明显变化(P>0.05)；CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组,即F组)中HLA-I mRNA的表达较CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中的表达无也明显变化(P>0.05)。2.在蛋白水平上：①TAP-1和TAP-2:CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中TAP-1、TAP-2蛋白的表达较CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组,即B组)中的表达明显降低(P<0.05)；CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组,即F组)中TAP-1、TAP-2蛋白的表达较CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中明显表达升高(P<0.05)；②LMP-2和LMP-7:CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中LMP-2、LMP-7蛋白的表达较CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组,即B组)中的表达升高(P<0.05)；CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组,即F组)中LMP-2、LMP-7蛋白的表达较CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中的表达明显降低(P<0.05)；③HLA-I:CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-1组,即C组)中HLA-I蛋白的表达较CNE2 PCMV-N-flag组(空载体组,即B组)中的表达明显降低(P <0.05);CNE2-NFKB-KO-PCMV-N-flag-BCRF组(敲除NF-κB且过表达BCRF-1组,即F组)中HLA-I蛋白的表达较CNE2 PCMV-N-flag-BCRF组(过表达BCRF-I组,即C组)中的表达明显降低(P<0.05)。[结论]vIL-10可以通过NF-κB通路抑制MHC-I类分子抗原加工和提呈的“操纵子”的表达,并且这种抑制可能发生在转录及转录后水平。敲除NF-κB p65后可部分提高CNE-2细胞的抗原提呈能力,为鼻咽癌的治疗提供新的思路。