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本研究以植物根际分离到的24株芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株为对象,分别测定了其对植物病原真菌和细菌的拮抗效果,共筛选出12株对植物病原菌抑制率较高的菌株,它们分别为AB、V3、SAI、3-1、N8-b、V5、25-1、25-2、25-5、25-9、25-10、25-17。选择其中抑菌效果较好且稳定的几个菌株对香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)等病原菌的抑菌机理进行了研究,本论文重点研究了菌株25-1、25-17对香蕉炭疽病菌的作用机理:平板对峙培养出现明显的抑菌环;以凹玻片法,用两菌株培养滤液处理病原菌分生孢子,其孢子萌发率明显降低;将细菌培养滤液和孢子悬浮液涂布于PDA平板上,两菌株培养滤液均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成。在普通光学显微镜和扫描电子显微镜观察显示,两菌株均可抑制香蕉炭疽病菌菌丝生长,造成菌丝分支增多,顶端和中央膨大,随着时间的延长畸变结构增加,菌丝呈念珠状或菌丝分支显著增多,且顶端细胞变形膨大聚集成簇,菌丝壁穿洞,内含物质泄漏,终使细胞崩解和消融,变成球状的空泡。 以芽孢杆菌菌株25-17为材料,通过克隆测序获得其编码抑菌蛋白TasA的基因全长,利用网上BLASTn、DNAman和DNAclub等生物信息学软件对该基因进行结构分析,实验数据表明,该基因共包含786个碱基,与已发表的Bacillus subtilis全基因组序列(Accession No:Z99116)中TasA基因(与143163～143948相对应)同源性达到99.24%,其中核苷酸的变异主要是同类碱基的转换,即G-A或C-T;而且大多数变异发生在密码子的第三位碱基上,并未引起蛋白质水平上的变化。该序列含有一个完整的开放阅读框(ORF)和一个终止密码子,该序列已经登录NCBI Genbank,登录号为AJ871386。利用http://npsa-pbil.ibcp.fr/cgi.bin/secpred_mlr.pl在线分析预测了TasA基因的氨基酸序列和二级结构特征。 本研究构建了含TasA基因的融合蛋白原核表达载体pET-TasA,并在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中利用IPTG诱导成功地进行了表达,SDS-PAGE检测结果显示蛋白TasA获得了正确融合表达。