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目的: 观察脯氨酸羟化酶2(prolyl hydroxylase domain2,PHD2)在糖尿病视网膜病变动物模型中的表达情况,探讨PHD2在糖尿病视网病变中的可能作用机制,揭示糖尿病视网膜病变治疗的新靶点。 方法: (1)早期糖尿病动物模型的制作:采用0.001mmol/L柠檬酸盐缓冲液配成10g/L的链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),实验组大鼠45只,对照15只,按60 mg/kg剂量左下腹腔内注射,72h后取大鼠尾血测血糖。将血糖≥16.7mmol/L的大鼠确定为糖尿病大鼠的模型,对照组腹腔注射柠檬酸盐缓冲液。 (2)建模成功的糖尿病大鼠定期检测血糖和测量体重,并记录。建立模型2个月后对眼部标本进行病理切片,行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)及免疫荧光化学染色,观察大鼠视网膜组织的病理改变及PHD2、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等因子在视网膜组织中的分布与表达情况,观察PHD2主要表达于何种视网膜组织细胞,分析PHD2与其他血管增生因子的相关关系。 (3)早期糖尿病大鼠眼内因子mRNA表达检测:应用RT-PCR方法检测PHD2、VEGF、GFAP等因子mRNA在眼内的表达情况。 结果 (1)糖尿病大鼠的体重随时间推移先增后减,血糖始终维持在高水平,与对照组比较,有统计学意义(p<0.01) (2)视网膜组织病理学检查 HE染色结果:光镜下正常对照组大鼠可见视网膜组织表面光滑,各层结构清晰完整,细胞排列整齐。与对照组相比,糖尿病大鼠组视网膜各层开始变薄,排列紊乱,部分血管呈扩张趋势,并可见色素上皮细胞增生。 (3)免疫荧光染色:在正常大鼠视网膜中,PHD2不表达,GFAP及VEGF主要在星形胶质细胞中表达,其余各层组织不表达;但在早期糖尿病大鼠视网膜全层中可见 PHD2、GFAP及VEGF染色均为强阳性,以神经胶质细胞表达为主,PHD2与VEGF和GFAP共表达。 (4)实验组PHD2、GFAP及VEGF mRNA表达水平较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(p<0.01)。 结论: 早期糖尿病大鼠视网膜中PHD2高表达可能由局部高浓度血糖诱导神经胶质细胞分泌产生,进而促进VEGF、GFAP的表达增高,PHD2在糖尿病视网膜病变发生过程中可能起重要作用。