Otx1突变和过表达情况下运动皮层第V层锥体神经元的形态学分析

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yushui223
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目的:大脑皮层(Cerebral cortex)是认知功能、感知功能、运动协调发挥的基础。转录因子Otx1在大脑的形态发育中起关键作用,并高度表达于大脑皮层第五层的锥体神经元中(Layer V pyramidal cells,L5PCs)。Otx1突变小鼠在第五层的轴突修剪过程有缺陷并表现出癫痫行为。尽管Otx1基因在大脑中的功能已被较广泛研究,但Otx1基因是否对L5PCs形态功能发挥作用还不清楚。作为我们组进行的系统研究Otx1基因对L5PCs生理特性作用课题的一部分,本人论文重点研究Otx1基因突变对运动皮层L5PCs形态和以及对小鼠生长的影响。  方法:用年龄相同的Otx1突变小鼠和正常小鼠,首先,通过体重测量比较,初步探究Otx1突变对小鼠生长发育的影响;其次,对用全细胞膜片钳记录后的运动区脑片进行免疫组化染色,利用Neurolucida系统对染色后的L5PCs进行三维(3Dimensional,3D)重构,以便进行定量分析,来探究Otx1基因突变对L5PCs形态发育是否有影响;最后,通过免疫荧光等技术观察、分析Otx1点突变小鼠与正常小鼠相比在L5PCs的OTX1蛋白表达是否有差异。另外,使用子宫内电穿孔技术(In uteroelectroporation,IUE)使Otx1基因过表达于大脑皮质第二层或第三层皮质(L2/3)的锥体神经元中(pyramidal cells,PCs),在正常情况下Otx1基因不表达于这些皮层,以研究过表达情况下对PCs的形态影响。  结果:Otx1突变小鼠体重明显低于正常小鼠体重,统计学比较有明显差异。在Otx1基因突变情况下,L5PCs基树突的测量值与对照组比较显著性减低。而在Otx1过表达的锥体细胞(PCs)与GFP对照组相比情况恰好相反:Otx1过表达的PCs基树突参数显示较高的测量值。对基树突的分支节段(branch order)参数进行分析,在Otx1基因突变情况下,L5PCs的平均节段数(segment number)和平均节段长度(averagesegment length)都比对照组的测量值偏低,而过表达情况下结果正好相反:Otx1过表达的PCs的测量值偏高。免疫荧光和定量分析结果观察到Otx1突变在大脑皮质运动区第五层的蛋白表达与对照组相比无明显差异。  结论:尽管Otx1基因突变没有影响到其在大脑皮层第五层上的蛋白表达,但其导致L5PCs基树突形态改变。这些改变在一定程度上可能与这些神经元在电生理特性及突触连接方面的功能性变化相关。从总体看,Otx1基因作为转录因子对小鼠的生长发育有一定影响。
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