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目的：胃癌(GC)是全球第五大常见恶性肿瘤，是全球两性中癌症死亡的第三大原因，尽管近几十年来GC的诊断和治疗取得了进展，但GC患者的预后仍然很差，特别是在中国，五年生存率仅为约30％。在我们课题组的以前研究中，合成并鉴定了24种3,4,5-三甲氧基黄酮类苯并咪唑衍生物，其中化合物15(FB-15)是一种潜在的抗肿瘤活性化合物，本文通过研究3,4,5-三甲氧基黄酮类苯并咪唑衍生物化合物15(FB-15)对人胃癌HGC-27细胞凋亡的影响及机制研究，为胃癌的药物治疗开拓新思路和提供理论依据。
方法：CCK-8检测FB-15的抗肿瘤增殖细胞活性；克隆形成实验检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞克隆增殖情况；流式细胞术检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞周期和凋亡的影响；流式细胞术检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞线粒体电位的影响；Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9试剂盒检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞Caspase活性的影响；Westernblot检测Bad、Bax、Bcl-XL以及Bcl-2蛋白的表达情况；FB-15经腹腔注射对BABL/c-nu裸小鼠急性毒性试验。
结果：CCK-8结果显示，在FB-15浓度为8、16、32、64以及128μmol/L时，抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖，并且比阳性对照药物(5-Fu)效果好；随着FB-15浓度增高，抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖作用增强，且呈剂量依赖性；在设定的FB-15浓度培养条件下，孵育的时间越长，抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖作用增强，且呈时间依赖性。
细胞克隆实验显示，用FB-15处理后，可以显著地抑制人胃癌HGC-27细胞的体外增殖能力，且呈剂量依赖性。
流式细胞仪检测细胞周期结果显示，在G0/G1期细胞比例显著增高且具有浓度-效应关系(从74.52±0.38%升高到85.86±2.05%)，而S期和G2/M期细胞比例明显降低且具有浓度-效应关系(S期从6.25±1.92%降到2.32±0.47%；G2/M期从13.55±2.86%降到6.87±1.70%)，且具有显著的统计学差异(P＜0.01)。表明FB-15可能是通过抑制细胞进入S期，将细胞有丝分裂阻断在G0/G1期，从而诱导人胃癌HGC-27细胞凋亡，且呈明显的剂量依赖效应。
流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示，与对照组相比经FB-15处理后晚期凋亡率和总凋亡率明显增加(晚期凋亡率由4.72±1.21%上升到18.25±16.47%；总凋亡率由16.41±4.05%上升到31.88±13.17%)，其差异有统计学意义(P＜0.05)，表明FB-15呈剂量依赖性诱导人胃癌HGC-27细胞凋亡。
流式细胞仪检测线粒体电位结果显示，与对照组相比FB-15(10、20、40μmol/L)处理24h后，人胃癌HGC-27细胞JC-1单体(绿色荧光)(%)从0.720±0.364%上升到2.710±0.416%，并且差异具有统计学意义(P＜0.01)，同时存在剂量依赖效应。表明FB-15可使人胃癌HGC-27细胞线粒体膜电位丢失，从而诱导其线粒体功能障碍。
Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9试剂盒检测Caspase活性结果显示，与对照组相比FB-15(10、20、40μmol/L)处理24h后，Caspase-3活性由40.263±23.250上升到186.591±8.140，Caspase-8活性由30.544±13.464上升到219.077±13.698，Caspase-9活性由25.744±8.685上升到154.195±11.171，其差异具有显著的统计学意义(P＜0.01)。表明FB-15能增加人胃癌HGC-27细胞Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9活性，且呈剂量依赖效应。
Westernblot实验检测Bcl-2家族蛋白结果显示，与β-actin内参相比，经FB-15处理24h后的人胃癌HGC-27细胞，呈剂量依赖性地上调Bad、Bax的表达和下调Bcl-XL、Bcl-2的表达，Bax/Bcl-2值由0.184±0.030上升到1.865±0.522，证实FB-15破坏了Bcl-2家族的平衡诱导人胃癌HGC-27细胞凋亡，并且与流式细胞术检测细胞凋亡的结果相符。
FB-15经腹腔注射对BABL/c-nu裸小鼠急性毒性试验结果显示，在腹腔注射给药结束后0～4小时内，生理盐水组和FB-15组小鼠自主活动未见明显异常；给药后连续观察14天，生理盐水组和FB-15组未见动物死亡；与对照组比较，FB-15给药组小鼠第4-14天体重无统计学差异，动物变化在小鼠正常体重增长范围内；大体解剖检查结果显示各器官表面和切面均未见明显异常情况。证实在本试验条件下，BABL/c-nu裸小鼠经腹腔注射FB-15，未见明显毒性反应剂量为150mg/kg(7.5mg/mL)。
结论：
1、FB-15能抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖；
2、诱导凋亡的机制是通过Bcl-2家族失调激活内源性途径。
方法：CCK-8检测FB-15的抗肿瘤增殖细胞活性；克隆形成实验检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞克隆增殖情况；流式细胞术检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞周期和凋亡的影响；流式细胞术检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞线粒体电位的影响；Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9试剂盒检测FB-15对人胃癌HGC-27细胞Caspase活性的影响；Westernblot检测Bad、Bax、Bcl-XL以及Bcl-2蛋白的表达情况；FB-15经腹腔注射对BABL/c-nu裸小鼠急性毒性试验。
结果：CCK-8结果显示，在FB-15浓度为8、16、32、64以及128μmol/L时，抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖，并且比阳性对照药物(5-Fu)效果好；随着FB-15浓度增高，抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖作用增强，且呈剂量依赖性；在设定的FB-15浓度培养条件下，孵育的时间越长，抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖作用增强，且呈时间依赖性。
细胞克隆实验显示，用FB-15处理后，可以显著地抑制人胃癌HGC-27细胞的体外增殖能力，且呈剂量依赖性。
流式细胞仪检测细胞周期结果显示，在G0/G1期细胞比例显著增高且具有浓度-效应关系(从74.52±0.38%升高到85.86±2.05%)，而S期和G2/M期细胞比例明显降低且具有浓度-效应关系(S期从6.25±1.92%降到2.32±0.47%；G2/M期从13.55±2.86%降到6.87±1.70%)，且具有显著的统计学差异(P＜0.01)。表明FB-15可能是通过抑制细胞进入S期，将细胞有丝分裂阻断在G0/G1期，从而诱导人胃癌HGC-27细胞凋亡，且呈明显的剂量依赖效应。
流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示，与对照组相比经FB-15处理后晚期凋亡率和总凋亡率明显增加(晚期凋亡率由4.72±1.21%上升到18.25±16.47%；总凋亡率由16.41±4.05%上升到31.88±13.17%)，其差异有统计学意义(P＜0.05)，表明FB-15呈剂量依赖性诱导人胃癌HGC-27细胞凋亡。
流式细胞仪检测线粒体电位结果显示，与对照组相比FB-15(10、20、40μmol/L)处理24h后，人胃癌HGC-27细胞JC-1单体(绿色荧光)(%)从0.720±0.364%上升到2.710±0.416%，并且差异具有统计学意义(P＜0.01)，同时存在剂量依赖效应。表明FB-15可使人胃癌HGC-27细胞线粒体膜电位丢失，从而诱导其线粒体功能障碍。
Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9试剂盒检测Caspase活性结果显示，与对照组相比FB-15(10、20、40μmol/L)处理24h后，Caspase-3活性由40.263±23.250上升到186.591±8.140，Caspase-8活性由30.544±13.464上升到219.077±13.698，Caspase-9活性由25.744±8.685上升到154.195±11.171，其差异具有显著的统计学意义(P＜0.01)。表明FB-15能增加人胃癌HGC-27细胞Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9活性，且呈剂量依赖效应。
Westernblot实验检测Bcl-2家族蛋白结果显示，与β-actin内参相比，经FB-15处理24h后的人胃癌HGC-27细胞，呈剂量依赖性地上调Bad、Bax的表达和下调Bcl-XL、Bcl-2的表达，Bax/Bcl-2值由0.184±0.030上升到1.865±0.522，证实FB-15破坏了Bcl-2家族的平衡诱导人胃癌HGC-27细胞凋亡，并且与流式细胞术检测细胞凋亡的结果相符。
FB-15经腹腔注射对BABL/c-nu裸小鼠急性毒性试验结果显示，在腹腔注射给药结束后0～4小时内，生理盐水组和FB-15组小鼠自主活动未见明显异常；给药后连续观察14天，生理盐水组和FB-15组未见动物死亡；与对照组比较，FB-15给药组小鼠第4-14天体重无统计学差异，动物变化在小鼠正常体重增长范围内；大体解剖检查结果显示各器官表面和切面均未见明显异常情况。证实在本试验条件下，BABL/c-nu裸小鼠经腹腔注射FB-15，未见明显毒性反应剂量为150mg/kg(7.5mg/mL)。
结论：
1、FB-15能抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖；
2、诱导凋亡的机制是通过Bcl-2家族失调激活内源性途径。