论文部分内容阅读
目的本课题拟通过研究骨髓标本EphB4基因启动子区甲基化状态对其表达的转录调控作用，探讨EphB4基因甲基化在儿童ALL发生发展中的生物学意义，以及EphB4基因甲基化状态对ALL患儿预后的影响。方法（1）分离骨髓单个核细胞并提取基因组DNA，采用亚硫酸氢盐修饰后（BisulfiteSequencing PCR，BSP）法检测EphB4基因甲基化水平。（2）提取骨髓样本总RNA，采用实时荧光定量核酸扩增（real time quantitation PCR, QPCR）检测EphB4基因mRNA表达；（3）提取骨髓样本总蛋白质，以Western blot法检测EphB4蛋白表达水平。（4）对比甲基化组及非甲基化组ALL患儿对诱导缓解治疗的效果，分析EphB4基因甲基化对ALL儿童治疗效果的影响。结果：（1）、确定ALL患儿骨髓单个核细胞EphB4基因启动子区域CpG岛存在甲基化,甲基化水平在7.94-36.5%之间，平均水平为15.76%，甲基化率为32.5%（13/40），对照组均未发生甲基化，经Fisher精确检验差异有统计学意义（P<0.05）；（2）、对照组及未发生甲基化患儿mRNA相对表达量（21.14±4.95及11.24±3.03）明显高于发生甲基化ALL患儿（5.89±2.40），并且ALL患儿中甲基化程度越高者表达越少；（3）、Western blot检测发现发生甲基化的ALL患儿骨髓单个核细胞中几乎无该基因的表达，而对照组细胞可检测到EphB4基因的表达，非甲基化的ALL患儿EphB4基因表达减弱。（4）、甲基化组2年EFS率（68.4±1.58）%高于非甲基化组2年EFS率为（91.7±8）%。结论： ALL患儿骨髓EphB4基因启动子区域CpG岛存在异常甲基化并影响其表达，对照组患儿未发生甲基化。EphB4基因甲基化状态在儿童ALL的发病及预后中发挥作用。