中医学认为,穴位是经络气血输注于体表的特定部位,是经络-脏腑联系的重要环节,具有诊断和治疗作用。研究表明,内脏疾病时体表的敏化点位置与穴位定位高度重合,并认为穴位是病理条件下体表出现的一种以神经源性炎性反应为主的敏感区域,即穴位敏化现象。刺激敏化穴位能够通过神经、内分泌、免疫多种途径调节内脏功能,促进机体的自稳态调节。内脏功能主要由自主神经系统支配,与副交感神经相比,交感神经几乎参与了机体所有重要器官的功能调节,在内稳态调节中发挥重要作用。前期研究表明,内脏疾病如心肌缺血时可以引起交感神经兴奋及交感重构现象。但上述现象背后,内脏疾病的自愈过程、交感神经活动以及穴位敏化之间的相互关系并不明确。同时,针灸干预对内脏疾病的良性调整作用已被证实,因此,进一步探讨病理条件下针灸干预在上述三者关系中的可能性作用,对于揭示穴位的自然属性及针灸的作用机制具有十分重要的意义。目的本研究以心肌缺血模型大鼠为实验对象,观察:1)心肌缺血造模对体表敏化点分布、心交感神经活动的影响;2)疾病条件下,敏化点感觉传入及刺激敏化点对交感神经活动的影响;3)慢性MI模型引起的交感神经芽生及交感-感觉偶联;4)电针干预对慢性MI模型的良性调整作用与交感神经的关系。探讨心脏功能的自愈过程、交感活动、穴位敏化的相关联系,以及针刺对三者关系的调节作用,为阐释穴位敏化的科学意义提供一定的实验依据。方法本实验以SD大鼠为实验动物,通过冠状动脉左前降支结扎造成心肌缺血（myocardial ischemia,MI）模型,分成四部分进行:实验一主要探讨心脏疾病对体表敏化点及其分布规律的影响:健康雄性SD大鼠18只,随机分为Control组（n=6）与AMI（n=12）组。模型组进行（acute myocardial ischemia,AMI）模型制备,两组均通过尾静脉注射Evans Blue（EB）,通过小动物活体荧光成像技术,Von Frey电子测痛仪,观察AMI造模对EB渗出点及其分布规律、渗出点痛阈的影响;实验二主要探讨刺激敏化区对AMI模型大鼠心交感神经的影响:雄性SD大鼠12只,通过神经电生理技术在体记录颈上心神经活动,及心率变异性（Heart rate HRV）LF/HF比值分析,观察AMI模型制备、敏化区感觉传入、敏化区伤害性刺激（钳夹、电针、热刺激）对心交感神经活动的影响;实验三主要探讨慢性MI模型大鼠DRG及皮肤中交感神经的芽生现象:SD大鼠32只,随机分为Control组、MI 3 d组、MI 7 d组、MI 28 d组（n=8）。通过免疫组织化学及免疫印迹（Western Blot）实验方法,观察慢性MI模型大鼠心脏同节段DRG及皮肤中TH、CGRP表达的变化,研究交感神经芽生及交感-感觉偶联与慢性MI模型病程的关系;实验四主要探讨电针内关穴对慢性MI模型的治疗效应与交感神经活动的关系:健康雄性SD大鼠80只,随机分为模型组、电针组、阿替洛尔组、阿托品组。电针组给予双侧“内关”电针刺激（15 Hz,1.5 mA,20min）,阿替洛尔组连续皮下注射阿替洛尔（4 mg/Kg,i.p.,2次/天）28 d;阿托品组连续腹腔注射阿托品（4 mg/Kg,i.p.）28 d。分别在模型前、模型后、模型后7 d、14 d、21 d及28 d测量各组大鼠心电图ST段高度的变化,采用高分辨率超声心动图影像系统于上述时间点进行超声心动图检查,测量各组大鼠心功能EF及FS值的变化;在28 d时,采用神经电生理技术在体记录各组大鼠颈上心神经活动,采用Millar导管记录各组大鼠左心室dp/dt_max、dp/dt_min水平。结果1心肌缺血模型诱发体表敏化及分布规律研究模型后尾静脉注射EB,可以在AMI组大鼠同/近节段（C₈-T₈）观察到蓝色渗出点,而Control组大鼠无蓝色渗出点出现;AMI大鼠体表渗出点痛阈值较对侧非渗出点显著下降（P<0.001）,提示急性心肌缺血可以引起大鼠体表同或近节段出现敏化点,即穴位敏化。2刺激敏化区对AMI模型大鼠心交感神经活动的影响模型后,大鼠心交感活动与LF/HF比值均较模型前明显增加（P<0.001）;刺激敏化区能够增加心交感神经活动（P<0.05）,调节LF/HF比值（P<0.05）;剪断左侧臂丛神经后,交感神经活动较模型后显著降低（P<0.05）,提示:（1）急性心肌缺血时可以引起交感兴奋,这与敏化穴位的感觉传入密切相关;（2）刺激敏化区能够增加交感神经活动,但对病理条件时交感-迷走神经平衡表现为良性调节作用。3慢性MI模型交感神经活动及交感-感觉偶联与Control组相比,MI 3 d、7 d及28 d组大鼠心交感神经活动均显著升高（P<0.05）,MI 3 d、7 d组大鼠LF/HF比值显著增加（P<0.05）,但随病程延长呈降低趋势。与Control组相比,MI 3 d、7 d及28 d组DRG及皮肤中TH的表达量均显著增高（P<0.05）,可以观察到交感神经芽生及交感-感觉偶联现象,并与心交感神经兴奋性呈正相关。提示:病理条件时交感兴奋能够启动机体的自我修复机制,并通过交感芽生方式参与内脏稳态调节。4电针内关穴促进慢性MI模型大鼠ST段高度及心功能恢复的作用研究4.1各组大鼠生存率比较MI模型的死亡时间主要集中在模型后7 d内,虽然电针组与阿替洛尔组大鼠的生存率高于其它两组,但四组生存率组间比较无统计学差异（P>0.05）,具体为模型组生存率为50%,电针组55%,阿替洛尔组70%,阿托品组45%。4.2电针内关穴对慢性MI模型大鼠心交感神经活动影响与模型组相比,电针组与阿替洛尔组心交感活动显著降低（P<0.05）,而阿托品组交感活动较模型组显著升高（P<0.05）,提示电针内关穴可以改善心脏疾病时交感神经兴奋性增强,这种效应与调节心脏β₁-AR表达有关。4.3电针内关穴对慢性MI模型大鼠ST段高度的影响重复测量结果显示:与模型组及阿托品组相比,电针组ST段随时间的变化受分组的影响（P<0.05）,呈逐渐恢复趋势,与阿替洛尔组无差异（P>0.05）;阿托品组ST段的变化趋势与模型组比较无差异（P>0.05）,提示电针内关穴能够促进MI模型心电图恢复,可能与调节β₁-AR和M-AChR表达有关。4.4电针内关穴对慢性MI模型大鼠EF及FS值的影响重复测量结果显示:电针组EF及FS的整体变化水平与模型组、阿替洛尔组及阿托品组比较均存在组间差异（P<0.05）,提示电针内关穴能够改善MI模型后心功能,其作用机制除与调节心脏β₁-AR与M-AChR表达外,还与其它调节机制相关。4.5电针内关穴对慢性MI模型大鼠dp/dt_max、dp/dt_min影响与模型组相比,电针组及阿替洛尔组大鼠dp/dt_max、dp/dt_min水平显著升高（P<0.05）,提示电针内关穴能够通过调节心肌组织β1-AR表达改善心功能;阿托品组大鼠dp/dt_max、dp/dt_min水平与模型组相比无显著变化（P>0.05）,提示心脏疾病时,心功能自我修复过程与心肌组织M-AChR活动有关。结论1.心肌缺血时引起体表同或近节段出现体表敏化点（穴位敏化现象）,敏化穴位的感觉传入对靶器官的交感神经活动有增加效应。2.心肌缺血导致交感神经活动增强,激活机体的自我调节机制;同时在同或近节段的DRG及皮肤中出现交感芽生,形成交感-感觉偶联结构,参与机体的自愈过程。3.与心脏同节段的类针灸样刺激能够增加交感神经兴奋性,但对交感-迷走神经平衡表现为良性调节效应;4.慢性心肌缺血时,心交感神经放电的频率增加与生存率降低有关;同时心功能的自我修复过程与迷走神经功能联系更为紧密;5.电针内关穴通过调节心肌组织中β₁-AR和M-AChR活性,促进慢性心肌缺血模型心功能的自我修复机制。