PpyMYB144调控梨果锈木栓质形成的机制研究

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梨(Pyrus)是原产于中国的落叶果树,主要分为四种类型:白梨、砂梨、秋子梨和西洋梨。其中,‘翠冠’是我国广泛栽培的砂梨品种。在长江中下游地区,‘翠冠’梨果实发育过程环境条件多雨高湿,果实表面容易形成锈斑,严重影响其外观品质,果实的商品性也因此大打折扣。木栓质是梨果锈主要组成物质,果实套袋处理通过抑制木栓质合成相关基因表达,减轻梨果锈的发生。本论文以‘翠冠’梨果皮作为试验材料,结合减缓果锈形成的套袋处理,观察果实发育过程中未处理(有锈)与套袋处理(无锈)梨果皮结构差异并分析相关物质含量差异;基于转录组测序数据,围绕PpyMYBs转录因子家族成员,通过基因表达分析、进化分析,双荧光素酶实验和烟草瞬时过表达功能验证等,分析并明确参与梨果锈形成的关键PpyMYBs成员,结果如下:1.明确果实发育过程中未处理和套袋处理‘翠冠’梨果锈的发生及木栓质含量的变化。在‘翠冠’梨果实发育过程中,发育的中后期发生了大量果皮锈斑的积累。通过成熟梨果皮冷冻切片及染色观察,发现相对于套袋处理梨果皮,未处理梨果皮角质膜薄且不完整,下层存在明显木栓层且有黄褐色物质积累于木栓层外侧;木栓质总含量的增加与梨果锈的发生显著相关,在多种木栓质单体组分中,α,ω-双羧基脂肪酸含量在未处理组中存在显著差异。2.基于未处理和套袋处理梨果皮的转录组测序数据,筛选获得多个差异表达的PpyMYBs转录因子,并分析相关基因在梨果实发育过程中的表达模式,PpyMYB34,PpyMYB138,PpyMYB138L,PpyMYB139,PpyMYB144基因表达在梨果锈形成过程中逐渐升高,而果实套袋处理能显著抑制相关基因的表达。与此同时,调控梨果皮木栓质α,ω-双羧基脂肪酸组分合成的结构基因PpyCYP86A1,PpyCYP86B1在‘翠冠’梨果皮中的表达与梨果锈形成呈显著相关。3.明确PpyMYB144调控梨果皮木栓质的机制。利用双荧光素酶实验体系,发现PpyMYB34,PpyMYB138,PpyMYB138L 和 PpyMYB139 对 PpyCYP86A1 和PpyCYP86B1启动子均没有调控效应,PpyMYB144可转录激活PpyCYP86B1启动子活性。启动子结合元件分析结果显示PpyCYP86B1中存在MYB转录因子结合的AC元件,PpyMYB144对突变AC元件的PpyCYP86B1启动子无明显的调控效应,说明PpyMYB144特异的结合并激活PpyCYP86B1启动子的AC元件。在烟草中过表达PpyMYB144,木栓质合成相关NbCYP86B1基因和木栓质含量均显著升高。综上所述,本文研究发现了 1个参与‘翠冠’梨果锈木栓化调控的转录因子PpyMYB144,PpyMYB144激活木栓质合成结构基因PpyCYP86B1,促进木栓质单体α,ω-双羧基脂肪酸积累,进而调控果锈的形成。
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