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目的:构建p53、p16基因真核共表达载体,用脂质体法将野生型p53cDNA、p16cDNA转染入白血病细胞,并观察其在白血病细胞中的表达和对白血病细胞的生长的影响、作用。方法:设计并构建包含野生型p53cDNA、p16cDNA的真核双表达载体pBudCE4.1-53-16及对照组质粒pBudCE4.1-53、pBudCE4.1-16。试验分五组:正常对照组、阴性对照组(转染质粒pBudCE4.1)、对照组1(转染质粒pBudCE4.1-16)、对照组2(转染质粒pBudCE4.1-53)、试验组(转染质粒pBudCE4.1-53-16)。通过Lipofectamine 2000用脂质体法将各组质粒转染白血病细胞,①通过Cell Counting Kit-8(CCK-8),描绘各试验组细胞的生长曲线。②转染后48小时,收集各组细胞,细胞涂片用间接免疫细胞化学法检测外源性p53及p16瞬时转染的表达情况;收集各组细胞,裂解细胞,用western bolt检测外源性p53及p16瞬时转染的表达情况;收集各组细胞,乙醇固定后,PI染色后,通过流式细胞仪检测各试验组细胞的周期;收集各组细胞,annexin V、PI染色后,通过流式细胞仪检测各试验组细胞的凋亡。结果:成功构建了真核表达载体pBudCE4.1-53-16、pBudCE4.1-53、pBudCE4.1-16,经PCR和酶切鉴定插入基因的位点完全正确。通过Lipofectamine 2000,体外成功地将各组质粒转染入白血病细胞,48小时后,①通过间接免疫细胞化学法检测到白血病细胞外源性p53、p16蛋白的表达,转染pBudCE4.1-53组K562细胞p53阳性率32.2%,HL60细胞p53阳性率29.4%;转染pBudCE4.1-16组K562细胞p16阳性率32.6%,HL60细胞p16阳性率29.6%;转染pBudCE4.1-53-16组:K562细胞p53阳性率32.0%,p16阳性率32.4%;HL60细胞p53阳性率29.2%,p16阳性率29.6%。②通过western bolt检测到白血病细胞外源性p53、p16蛋白的表达:实验组(转染质粒pBudCE4.1-53-16)和对照组2(转染质粒pBudCE4.1-53)细胞表达P53蛋白,其余三组不表达;实验组(转染质粒pBudCE4.1-53-16)和对照组1(转染质粒pBudCE4.1-16)细胞表达P16蛋白,其余三组不表达。转染后48小时,①PI染色后,通过流式细胞仪检测各组细胞的周期:与对照组比较,试验组G0期细胞增多,差异有统计学意义(P<0.001)。②通过annexin V、PI染色后,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡:与对照组比较,实验组早期凋亡细胞增多,差异有统计学意义(P<0.001)。经CCK-8检测,实验组细胞生长速度低于对照组。结论:重组质粒pBudCE4.1-53-16体外转染白血病细胞后,目的基因能够在细胞中同时表达,并引起细胞周期的阻滞于G0期,诱导细胞的凋亡增加,细胞增殖的减少。