论文部分内容阅读
目的:在我国前列腺癌是男性中最常见的癌症类型之一,其发病率迅速上升。微小RNAs(miRNAs)与包括前列腺癌(PCa)在内的肿瘤的发生、发展有着千丝万缕的关系。本研究的目的是探讨miR-490-3p/异质核核糖核酸蛋白A1(hnRNPA1)信号通路在PCa中的作用,为前列腺癌的治疗提供新的靶点。方法:1.miR-490-3p在PCa组织和细胞系中的表达(1)通过qRT-PCR检测miR-490-3p在前列腺癌和癌旁组织中的表达差异(2)通过qRT-PCR检测miR-490-3p在前列腺癌细胞系和正常前列腺细胞中表达差异2.miR-490-3p对PCa细胞生物学行为的影响3.分别应用CCK-8试剂盒、EDU试剂盒和细胞克隆实验检测miR-490-3p对前列腺癌细胞增殖的影响(1)应用流式细胞仪检测miR-490-3p对前列腺癌细胞凋亡的影响(2)应用Transwell小室检测miR-490-3p对前列腺癌细胞迁移能力的影响(3)应用基质胶小室检测miR-490-3p对前列腺癌细胞侵袭能力的影响4.miR-490-3p在PCa进展中的分子机制(1)应用生物信息学数据库(miRanda,TargetScan)对miR-490-3p的靶基因进行预测(2)通过qRT-PCR、Western Blot、双荧光基因报告等实验验证miR-490-3p与靶基因的相互作用5.miR-490-3p对肿瘤形成的影响通过裸鼠皮下成瘤实验验证miR-490-3p对肿瘤形成和靶基因的影响结果:1.本研究发现,miR-490-3p在前列腺组织中表达明显低于其在癌旁组织的表达量。同时我们检测了四种前列腺癌细胞PC3,DU145,LNCaP和C4-2B以及正常的前列腺细胞RWPE-1中miR-490-3p的含量。结果显示,PCa细胞系中的miR-490-3p处于低表达状态。2.在LNCaP细胞转染miR-490-3p抑制剂和C4-2B细胞中转染miR-490-3p模拟物后,CCK8、低密度集落形成、EDU、Transwell迁移及侵袭实验、细胞凋亡实验结果显示过表达miR-490-3p明显抑制C4-2B细胞系的増殖、迁移、侵袭,并且促进细胞凋亡,然而miR-490-3p低表达有着相反的效果。3.通过TargetScan和miRanda等相关预测软件,我们得知hnRNPA1可能是miR-490-3p的潜在靶基因。通过荧光素酶报告基因检测我们证实miR-490-3p可以靶向结合hnRNPA1 3’-UTR。Western Blot结果显示表明miR-490-3p可明显抑制hnRNPA1在前列腺癌细胞株内的蛋白的表达水平。这些结果证实hnRNPA1是miR-490-3p的靶基因。4.转染miR-490-3p模拟物的C4-2B细胞在同一时间段产生较小的肿瘤,平均肿瘤体积和重量明显低于对照组。Western blot检测了hnRNPA1在小鼠肿瘤中的表达,转染miR-490-3p模拟物的C4-2B组与对照组相比hnRNPA1的表达降低。这些结果证实了miR-490-3p对前列腺癌存在抑瘤作用。结论:综上所述,miR-490-3p在前列腺癌组织和细胞系中低表达,hnRNPA1抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并诱导凋亡。