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本文以10%聚乙二醇600(PEG6000)预处理金钗石斛类原球茎体(Protocorm-like Bodies,PLBs)诱导其耐脱水性,并初步探讨了其耐脱水性的机理,主要研究结果如下:
1.耐脱水性的诱导用浓度为0%、10%、20%、30%、40%的PEG6000溶液,分别处理金钗石斛类原球茎体0h、6h、12h、24h、36h、72h和120h。结果发现:各处理中以10%PEG6000处理对PLBs伤害最小,经过120h的处理后,材料的成活率为76.67%,而此时40%PEG6000处理的材料成活率已低至0.56%,同时,在40%浓度PEG6000的处理中,材料的成活率在0~6h期间下降了45%,是所有时间段中成活率下降最快的阶段。因此可选用10%PEG6000诱导其耐脱水性,40%PEG6000处理材料6h模拟脱水过程。
采用10%PEG6000分别处理材料0h、6h、12h、24h、36h,以诱导其耐脱水性,继而转入40%的PEG6000溶液中脱水6h。于脱水前、后分别测定材料的成活率、相对含水量和相对电导率。
结果表明:材料在经过耐脱水性的诱导后,未进行模拟脱水的情况下,材料的成活率、相对含水量和相对电导率都无明显差异。证明以10%浓度的PEG6000溶液诱导材料的耐脱水性是可行的。
而脱水后,经诱导材料的成活率和相对含水量比对照组均有了明显的增高,经12h诱导的材料,效果最好,成活率和相对含水量分别是对照组的1.6倍和1.4倍。脱水处理过程中,经诱导材料和对照组的相对电导率都呈上升趋势,但对照组增加的更快,12h时分别达到31.5%和54.7%,开始出现显著差异,随着时间的延长,这种差异进一步增大。
结果显示:10%PEG6000处理明显提高了材料的成活率和相对含水量,表明10%PEG6000能够有效诱导金钗石斛PLBs的耐脱水性,且最佳诱导时间为12h。
2.细胞相容性物质的变化。
测定了不同诱导时间段对金钗石斛PLBs可溶性总糖(SS)、脯氨酸(Pro)、可溶性蛋白质、蔗糖、可溶性多糖等一系列可能与材料耐脱水性相关的细胞相容性物质含量的影响。
结果表明:脯氨酸、可溶性总糖、蔗糖的变化都与对照无明显差异,而可溶性蛋白质含量和可溶性多糖含量则出现了显著性差异。可溶性多糖的含量在诱导6h后开始出现显著性差异,且在24h时可溶性多糖含量达到2.597mg.g<-1>DW,为对照0.681mg.g<-1>DW的3.8倍,出现最大差异。
3.诱导过程中的过氧化反应测定了不同诱导时间段对金钗石斛PLBs超氧自由基、MDA以及SOD、POD、CAT三种过氧化保护酶含量的影响。
SOD、POD、CAT都具有清除自由基、保护细胞膜的功能。随着诱导时间的增加,三种抗氧化酶都有一个基本一致的变化过程:活性逐渐增加,达到最高值后,又开始下降,也就是诱导过程会出现一个酶活性高峰。三种酶之间的差异仅在于升高和下降开始的时间不同。
由于超氧自由基在诱导过程增高,导致MDA含量的增加,而这两种物质均为SOD、POD和CAT活性的诱导因子。该现象反映出在诱导过程中,PLBs发生了轻度脱水胁迫及过氧化反应。保护酶活性的升高,很可能与耐脱水性的提高相关。
综合上述结果,认为PLBs在诱导过程中可能通过增加可溶性多糖和可溶性蛋白质的含量,提高细胞的耐脱水的能力;通过增强抗氧化酶活性,提高细胞对脱水过程过氧化反应的抗性,以减轻水分胁迫对材料造成的过氧化伤害。