人重组C3d3蛋白原核表达、纯化和活性分析

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补体C3在机体免疫防御中起重要作用,研究发现,C3活性片段C3d具有增强体液免疫的功能,有可能成为新的佐剂.该课题利用重组DNA技术,串联3个人的C3d编码基因的片段(1214-1270AA),在原核细胞高效表达MS2-C3d3融合蛋白,通过纯化而获得99﹪以上纯度的重组蛋白质.利用荧光标记技术,体外研究标记FITC的MS2-C3d3蛋白与不同类型细胞的特异结合活性.荧光显微镜和流式细胞仪分析表明,C3d3蛋白能够特异结合Raji细胞、Jurkat、HL-60细胞,小鼠的脾脏细胞等,但不能结合TF-1细胞.此外,C3d3蛋白在低浓度能促进Raji细胞的增殖.这些结果提示获得的重组C3d3蛋白具有C3d的生物学活性,能与细胞上C3d受体CR2特异结合,可能具有佐剂活性,这些结果为以后体内的佐剂活性试验和将来人类肿瘤疫苗的研制及新型高效无副作用疫苗的研究打下基础.
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