骨桥蛋白(osteopontin, OPN)是一种富含天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸的分泌型强酸性糖蛋白,在含矿物质丰富牛科动物的骨基质中首次被发现。随后研究发现OPN在许多组织和体液中也有表达,包括肠胃、睾丸、奶、尿等,且参与了各项生理及疾病过程。近年来研究表明,OPN普遍存在于雄性哺乳动物的生殖系统中,但在同种或异种动物的表达都存在一定的差异,仅有55 KDa亚型的OPN与牛科动物繁殖力呈正相关,其它形式OPN均未发现与繁殖力相关。湖羊作为一个高繁殖力绵羊品种,目前主要集中在对雌性繁殖性能的研究,而雄性繁殖性能关注较少。因此,本研究选取雄性湖羊发育过程中生殖器官(睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾以及输精管)以及性成熟湖羊附睾尾部精子为研究对象,检测OPN基因的mRNA和蛋白水平在其发育过程中表达的差异,对研究OPN与雄性湖羊繁殖力关系提供了一定的理论基础。本研究共分为三个部分,第一部分对OPN蛋白在雄性湖羊生殖器官发育过程中的定位进行研究；第二部分主要是研究OPN基因mRNA的表达水平在其发育过程中表达的差异；第三部分检测OPN蛋白在其发育过程中的分子量大小,并分析了OPN蛋白在这个过程中表达的差异。主要的研究结果如下：第一部分OPN蛋白在雄性湖羊生殖器官发育过程的定位试验中,发现在8月龄(性成熟)湖羊睾丸中,OPN主要在减数分裂后期表达,在附睾和输精管中,OPN主要强烈表达于心间区主细胞的细胞质,基细胞中均无表达。免疫荧光(immunofluorescence, IF)结果显示,OPN在性成熟湖羊附睾尾精子顶体后部、尾部的中段和主段强烈表达,在顶体帽和尾部末端弱表达。在4月龄和10日龄湖羊中,OPN主要在睾丸间质中表达,而不是在生殖细胞。另外,在4月龄湖羊中,OPN主要在附睾头和附睾体的固有层和平滑肌表达,而在附睾尾和输精管表达于上皮细胞。在10日龄湖羊中,OPN在附睾的平滑肌上强烈表达,而在输精管上主要在上皮细胞表达。此外,10日龄湖羊输精管管腔中脱落的上皮细胞也可以看到OPN的免疫阳性反应。第二部分OPN基因在8月龄湖羊的睾丸、附睾以及输精管中mRNA的表达水均显著高于4月龄和10日龄的表达水平,而4月龄和10日龄组织中OPN基因mRNA的表达水平无显著性差异。此外,在同年龄阶段各组织中OPN基因mRNA的表达水平也存在一定的差异。第三部分免疫印迹检法测(western blot, WB) OPN蛋白在雄性湖羊各个时期不同组织的表达情况,首次检测到34 KDa亚型的OPN大量表达,另外有少量的30 KDa亚型OPN的表达。本试验利用灰度值分析发现OPN蛋白在相同时期不同组织中以及在不同时期同类型的个组织中的表达水平均无显著性差异。