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赭曲霉毒素A(ochratoxin A, OTA)是毒性仅次于黄曲霉毒素B1(AFB1)的真菌毒素,它会污染食品并通过食物链对人体造成危害。表面等离子体子共振(surface plasmon resonance, SPR)技术是一种新兴的食品分析检测技术,具有快速、无需标记、高灵敏、特异性高和检测限低等优点,能实时进行定性和定量分析。本文采用双通道SPR传感器(其中一个通道作为参比通道,扣除背景于扰),采用直接法和金纳米粒子作为传感层的方法,检测了只在OTA合成初期阶段表达的聚酮合成酶(polyketide synthase, PKS)基因的25个特异性碱基序列,建立了快速、高灵敏间接检测OTA的SPR新方法,为食品安全起到“预警作用”。同时考察了6-巯基己醇(6-mercapto-1-hexanol, MCH)作为封闭液对SPR响应信号的影响。主要研究内容如下：(1)用察式液体培养基培养赭曲霉3.4520(Aspergillus ochraceus NRRL3174),经过酶联免疫吸附试剂盒测定,该菌株可产生OTA毒素；通过提取赭曲霉总DNA并进行PCR特异性扩增,并与Genbank中基因库中己知的Aspergillus ochraceus NRRL3174的PKS基因序列进行同源性比较,发现PCR产物的序列与赭曲霉NRRL3174的PKS基因序列具有高度同源性。(2)选取PKS基因特异性的25个碱基序列作为寡核苷酸探针,通过在探针5’端连上巯基从而将其固定到SPR金片上,运用双通道SPR传感器进行直接检测,完全互补链的最低检测浓度为12.5nmol/L。试验设计了两条错配链作为阴性对照,检测发现错配链与探针只进行了部分杂交,其SPR响应值明显低于完全互补链的SPR响应值,且碱基错配个数越多,SPR响应值越低。(3)研究了MCH作为封闭液对SPR检测的影响,研究表明采用MCH作为封闭液可使DNA探针的取向更加相对有序,有利于DNA杂交,又减小了非特异性吸附,因而提高了杂交效率。加入MCH封闭的直接法最低检测浓度虽仍为12.5nmol/L,但SPR响应信号有所提高。同时成功检测了实际样品,验证了此方法的可行性。(4)通过柠檬酸钠还原法制备了15nm金纳米粒子,并用紫外可见分光光度计和透射电镜(Transmission electron microscope, TEM)对其进行表征；将金纳米粒子作为SPR生物芯片的传感膜,使用双通道SPR传感器检测PKS基因特异性的25个碱基序列。由于金纳米粒子本身的折射率大,且金纳米粒子表面的等离子体子与金膜本身的表面等离子体子发生了耦合,与直接法相比,运用金纳米粒子作为检测传感层,SPR响应信号远高于直接法,最低检测浓度也由12.5nmol/L降至0.25nmol/L,灵敏度提高了50倍。试验证明金纳米粒子作为传感层与以往使用金纳米粒子标记抗体或抗原相比,其作为传感层也能大大提高SPR检测灵敏度,且操作简单易行。