大鼠创伤性颅脑损伤后Hax-1与XIAP的表达变化及相互作用的研究

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目的研究造血干细胞特异性相关结合蛋白-1(HCLS1-associated protein X-1,Hax-1)与X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在大鼠创伤性颅脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)后大脑皮层损伤区周围的表达变化以及相互作用,并进一步探讨Hax-1与XIAP在大鼠创伤性颅脑损伤后神经元凋亡中的意义,为创伤性颅脑损伤的临床治疗提供新的思路。方法建立SD大鼠颅脑损伤模型,(1)运用Western Blot检测大鼠TBI后不同时点Hax-1、XIAP及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达变化。(2)运用免疫组织化学方法检测大鼠TBI后大脑皮层中Hax-1及XIAP的表达。(3)免疫荧光双标方法观察大脑皮层损伤区周围Hax-1、XIAP表达定位及与caspase-3阳性细胞共定位情况。(4)通过免疫共沉淀检测大鼠TBI后Hax-1与XIAP的相互作用。结果(1)Western Blot结果显示与对照组(sham)比较,大鼠TBI后Hax-1及XIAP蛋白水平表达逐渐增高,3d达到高峰,随后逐渐下降,且两者表达呈正相关(r=0.68,P<0.05);活化的caspase-3表达亦逐渐增高,3d亦达到高峰,随后逐渐下降,且与Hax-1、XIAP表达呈正相关(rH=0.60,rX=0.54,P<0.05)。(2)在大脑皮层损伤区周围,Hax-1与XIAP主要表达于神经元中,而星形胶质细胞几乎不表达,在3d表达的Hax-1与XIAP阳性细胞数较对照组明显增多(P<0.05)。(3)免疫荧光双标说明在大鼠TBI后大脑皮层神经元中Hax-1、XIAP与caspase-3共定位。(4)免疫共沉淀证实在大鼠正常脑组织中,Hax-1、XIAP存在相互作用,且TBI后二者相互作用明显增强。结论(1)大鼠创伤性颅脑损伤后大脑皮层损伤区周围Hax-1与XIAP蛋白表达具有时空性,且两者表达呈正相关性并能够相互作用。(2)大鼠创伤性颅脑损伤后Hax-1与XIAP参与神经元凋亡,它们的相互作用可能是颅脑损伤后神经元凋亡的关键调控过程。
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