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狂犬病是一种古老的疾病,一直对全世界的公共卫生造成极大的威胁,并导致每年约59000死于狂犬病。狂犬病的致病原为狂犬病毒(Rabies virus,RABV),其逃逸宿主中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)天然免疫的机制目前仍未完全清楚。我们之前的研究发现,在小鼠和犬感染模型中,狂犬病毒实验室固定毒株(弱毒株)能够激活天然免疫反应,而野毒株则不能激活。星状胶质细胞是组成血脑屏障(Blood-brain Barrier,BBB)的重要元件,其被证实可在中枢神经系统中通过激活天然免疫和调控BBB通透性来限制或清除病原微生物的感染,对中枢神经系统起到重要的保护作用。本文研究中,我们重点探索了星状胶质细胞在狂犬病毒感染时发挥的各方面功能。首先,为了验证本研究中所使用的狂犬病毒(DRV-AH08,简称DRV)具有野毒株的特性,我们建立了小鼠感染模型,发现DRV感染的小鼠死亡时间明显早于弱毒株B2c感染的小鼠,且DRV感染小鼠后并未表现出炎症反应和外周免疫细胞入侵中枢神经系统的现象,表明本研究中所使用的野毒株DRV具有野生型狂犬病毒的特性,符合后续实验需求。其次,我们分离、纯化和培养了原代星状胶质细胞(Primary astrocyte),并用DRV和B2c分别对原代星状胶质细胞进行感染,我们发现B2c表现为暂时性感染,而DRV则可以持续的感染星状胶质细胞。我们进一步比较了DRV和B2c感染星状胶质细胞后MAVS通路关键分子的表达水平,结果显示B2c感染后的MAVS通路激活水平显著高于DRV,且这种激活是由于病毒复制转录过程中产生的RNA引起的。因此,我们继续对狂犬病毒两种不同毒株感染星状胶质细胞后ds RNA的产生水平进行了分析,结果表明B2c感染星状胶质细胞后产生的ds RNA水平要明显高于DRV感染组。我们进一步利用MAVS和TLR7基因敲除小鼠进行了体内、体外的感染实验,发现B2c能够持续感染从MAVS基因敲除小鼠中分离的星状胶质细胞,但依旧不能感染TLR7基因敲除小鼠中分离的星状胶质细胞,验证了MAVS通路是狂犬病毒强弱毒株感染星状胶质细胞后产生差异的关键通路。此外,我们还发现B2c感染星状胶质细胞后产生的与MAVS通路相关的炎症因子要明显高于DRV,与DRV感染相比,狂犬病毒B2c感染星状胶质细胞后能够显著增加体外BBB模型对大分子物质的通透性,且B2c感染的星状胶质细胞培养上清能显著降解紧密连接蛋白ZO-1。总之,本研究发现星状胶质细胞在限制狂犬病毒感染中发挥这重要作用,具体表现在它可以通过活化MAVS通路产生IFN和ISG来直接限制狂犬病毒弱毒株的复制,同时可以产生大量的炎症因子促使BBB通透性增加来促进中枢神经系统中的病毒清除;与之相反的,狂犬病毒的野毒株在感染星状胶质细胞后则可通过限制ds RNA的产生来逃避MAVS通路的激活,从而实现持续性感染,不改变BBB的通透性,使病毒逃避被清除。本研究结果为阐明狂犬病毒的野毒株逃逸天然免疫的机制奠定基础,并对狂犬病的临床治疗提供了新的思路。