异育银鲫（Carassius auratus gibelio）是我国重点养殖品种,具有较高的经济效益。然而,鲤疱疹病毒Ⅱ型（Cy HV-2）引起的“鳃出血”症的爆发给我国鲫养殖业带来巨大损失。mi RNA作为一种微型RNA片段（长度大约为22-25 nt）,其功能多样,广泛参与组织分化、病毒防御、细胞增殖和凋亡、组织病变和代谢等。研究发现,在Cy HV-2感染宿主过程中,大量micro RNA参与基因调节,但是不同mi RNA调节靶标基因的作用有待于深入研究。本研究首次推断cc BAX蛋白是Bcl2家族成员,其包含BH1、BH2、BH3结构域,可能是线粒体凋亡通路的重要蛋白之一。研究证实了mi R-124与宿主基因ccbax（silver crucian carp bax）之间的调节作用。具体研究内包括:1.cc BAX多克隆抗体制备及其特异性分析本研究首次在病毒感染的转录本中发现bax基因的表达差异性。因此,利用生物信息学分析其基本序列,ccbax基因ORF区长度为612 bp,编码204个氨基酸,cc BAX蛋白包含凋亡相关结构域BH1-BH3和一个跨膜结构域TM,这些结构域是促进细胞凋亡基因的保守结构域。为了制备特异性检测该蛋白的抗体,对该蛋白进行体外表达,本实验构建p GEX-4T-3-cc BAX原核表达质粒,于BL21大肠杆菌中成功转化并表达。进一步验证抗体有效性和特异性,结果表明本实验制备的抗体能特异性识别cc BAX体外表达cc BAX-GST融合蛋白、GST标签蛋白、细胞系的cc BAX蛋白,且抗体效价达到5000。2.ccbax基因在体内和体外的表达分析1)为进一步解析异育银鲫bax基因的生物学功能,本实验构建p EGFP-N1-cc BAX和p Ds Red-N1-cc BAX表达载体,将重组质粒转入草鱼（Ctenopharyngodon idellus）性腺细胞系（GCO）内观察其表达分布,发现cc BAX蛋白表达分布于整个细胞质基质中。2)体外合成si RNA片段,将其转染至Gi CF细胞,筛选发现si-1对cc BAX蛋白表达具有显著抑制效果。3)检测ccbax基因在Cy HV-2感染和未感染状态下Gi CF中的表达,发现未感染状态下cc BAX蛋白表达稳定,其感染状态下m RNA和蛋白水平表达具有一致性,且在感染过程中有显著变化。4)在鱼体组织中的表达发现,cc BAX在鱼鳃、肾脏、脾脏组织中表达量较高,推断该蛋白具有重要免疫调节功能。3.鉴定mi R-124与ccbax基因相互作用关系通过生物信息学软件预测,在本团队建立的mi RNA文库中发现有5条与宿主基因ccbax存在潜在调控作用关系。为进一步验证其潜在的靶向关系,分别构建野生型pmir GLO-cc BAX-3′UTR-WT和突变型pmir GLO-cc BAX-3′UTR-MT。将mimics和NC分别与pmir GLO-cc BAX-3′UTR-WT共转染确定其作用关系。为进一步鉴定其作用靶位点,将mimics和NC分别与pmir GLO-cc BAX-3′UTR-MT质粒共转。结果证实mi R-124、mi R-29b与cc BAX存在作用关系。其次,通过突变型报告载体实验发现mi R-124通过作用于cc BAX-3′UTR中的种子序列（AGUGCUU）调控cc BAX表达,其结合位点在鲤科鱼类中极其保守,这些结果有助于更好理解mi RNA介导的鱼类BAX调控机制,为后续研究鱼类bax基因调控下游凋亡机制提供有力证据。