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目的:
通过对去卵巢雌性成年期SD大鼠复制绝经综合征动物模型,以大鼠阴道脱落细胞涂片的结果判断大鼠动情周期的变化并作为去势成模的标准。通过对模型大鼠的体温、体质重量及子宫指数、子宫病理形态学、血清性激素、下丘脑弓状核组织中与生殖内分泌相关的神经递质的水平变化进行研究,探讨临床治疗绝经综合征的经验用方五加丹方的作用机理,为临床应用提供实验依据。
方法:
1.将入选大鼠随机分为空白组,模型组,假手术组,五加丹方高、中、低剂量组,中药对照组、西药对照组。去势法造模,术后以阴道脱落细胞涂片结果确定模型复制成功。
2.成模后给予五加丹方及中、西对照药灌胃。记录大鼠行为学及体温变化。实验结束时测体质重量,子宫重量,计算子宫指数。病理组织学观察子宫微观形态。
3.各组大鼠腹主动脉取血,ELISA技术检测大鼠血清性激素水平。各组大鼠下丘脑弓状核组织取材,ELISA技术检测下丘脑组织匀浆PLC-β1、IP3、IP3R、CaM水平。PCR技术检测下丘脑弓状核组织Kiss-1、GPR54、GnRH、IP3R-1、PLC-βmRNA的表达变化,Western-blot技术检测Kiss-1、GPR54、GnRH、CaM蛋白的表达。
结果:
1.五加丹方对MPS大鼠体温的影响:各组大鼠平均腹温略高于同组平均耳温,但尚不具统计学意义。与空白组比较,模型组平均耳温及平均腹温均显著升高(P<0.01),以术后第3周最为明显。与模型组比较,五加丹方高剂量组、中剂量组、中药、西药对照组的平均耳温与平均体温均显著下降(P<0.01);低剂量组平均耳温显著下降(P<0.01),平均腹温也明显下降(P<0.05)。
2.五加丹方对MPS大鼠子宫指数及子宫病理形态的影响:去势后各组大鼠较空白组体质重量均上升(P<0.01),子宫重量下降(P<0.01),子宫指数降低(P<0.01),但假手术组体质重量则下降(P<0.05),子宫重量无明显变化(P>0.05)。高剂量组子宫重量、子宫指数均增加(P<0.01)。镜下发现模型组子宫内膜层、肌层萎缩,腺体萎缩、血管腔明显狭窄;各给药组内膜层、肌层明显增厚,腺体增大、血管腔充盈,以高剂量组、西药对照组改善最为明显。
3.五加丹方对MPS大鼠血清性激素水平的影响:模型组血清E2明显降低(P<0.01),血清FSH、LH升高(分别为P<0.01和P<0.05),表明模型复制成功。与模型组相比,五加丹方各组FSH均明显降低,高剂量组、中剂量组血清E2升高,高剂量组LH水平降低。
4.五加丹方对MPS大鼠下丘脑弓状核神经递质的影响:去势后Kiss-1、GPR54、GnRH、PLC-β1、IP3R1mRNA和Kiss-1、GPR54、GnRH、CaM蛋白表达较空白组均升高,五加丹方能够下调这些神经递质的基因和蛋白的表达。也能够使去势雌性大鼠下丘脑组织中升高的PLC-β1、IP3、IP3R、CaM水平下降。
结论:
1.五加丹方可有效缓解MPS大鼠体温的升高。五加丹方可以增加去势大鼠子宫重量,升高子宫指数,以高剂量组及中剂量组效果明显。
2.五加丹方可以改善MPS大鼠子宫的微观形态,使子宫腺体和毛细血管明显增多,以高剂量组最为明显。
3.五加丹方能够有效升高MPS大鼠血清E2水平,降低血清FSH、LH水平,五加丹方可以提高去势雌性大鼠体内雌二醇水平或者促进体内雌二醇的转化生成,从而起到改善MPS的作用。
4.五加丹方通过对MPS大鼠下丘脑弓状核促性腺激素释放激素GnRH的上游调节因子Kiss-1、GPR54及PLC-β1、IP3、IP3R、CaM等表达的影响,起到下调GnRH mRNA和蛋白表达的作用,从而协调生殖轴功能,改善MPS患者生殖内分泌水平。
通过对去卵巢雌性成年期SD大鼠复制绝经综合征动物模型,以大鼠阴道脱落细胞涂片的结果判断大鼠动情周期的变化并作为去势成模的标准。通过对模型大鼠的体温、体质重量及子宫指数、子宫病理形态学、血清性激素、下丘脑弓状核组织中与生殖内分泌相关的神经递质的水平变化进行研究,探讨临床治疗绝经综合征的经验用方五加丹方的作用机理,为临床应用提供实验依据。
方法:
1.将入选大鼠随机分为空白组,模型组,假手术组,五加丹方高、中、低剂量组,中药对照组、西药对照组。去势法造模,术后以阴道脱落细胞涂片结果确定模型复制成功。
2.成模后给予五加丹方及中、西对照药灌胃。记录大鼠行为学及体温变化。实验结束时测体质重量,子宫重量,计算子宫指数。病理组织学观察子宫微观形态。
3.各组大鼠腹主动脉取血,ELISA技术检测大鼠血清性激素水平。各组大鼠下丘脑弓状核组织取材,ELISA技术检测下丘脑组织匀浆PLC-β1、IP3、IP3R、CaM水平。PCR技术检测下丘脑弓状核组织Kiss-1、GPR54、GnRH、IP3R-1、PLC-βmRNA的表达变化,Western-blot技术检测Kiss-1、GPR54、GnRH、CaM蛋白的表达。
结果:
1.五加丹方对MPS大鼠体温的影响:各组大鼠平均腹温略高于同组平均耳温,但尚不具统计学意义。与空白组比较,模型组平均耳温及平均腹温均显著升高(P<0.01),以术后第3周最为明显。与模型组比较,五加丹方高剂量组、中剂量组、中药、西药对照组的平均耳温与平均体温均显著下降(P<0.01);低剂量组平均耳温显著下降(P<0.01),平均腹温也明显下降(P<0.05)。
2.五加丹方对MPS大鼠子宫指数及子宫病理形态的影响:去势后各组大鼠较空白组体质重量均上升(P<0.01),子宫重量下降(P<0.01),子宫指数降低(P<0.01),但假手术组体质重量则下降(P<0.05),子宫重量无明显变化(P>0.05)。高剂量组子宫重量、子宫指数均增加(P<0.01)。镜下发现模型组子宫内膜层、肌层萎缩,腺体萎缩、血管腔明显狭窄;各给药组内膜层、肌层明显增厚,腺体增大、血管腔充盈,以高剂量组、西药对照组改善最为明显。
3.五加丹方对MPS大鼠血清性激素水平的影响:模型组血清E2明显降低(P<0.01),血清FSH、LH升高(分别为P<0.01和P<0.05),表明模型复制成功。与模型组相比,五加丹方各组FSH均明显降低,高剂量组、中剂量组血清E2升高,高剂量组LH水平降低。
4.五加丹方对MPS大鼠下丘脑弓状核神经递质的影响:去势后Kiss-1、GPR54、GnRH、PLC-β1、IP3R1mRNA和Kiss-1、GPR54、GnRH、CaM蛋白表达较空白组均升高,五加丹方能够下调这些神经递质的基因和蛋白的表达。也能够使去势雌性大鼠下丘脑组织中升高的PLC-β1、IP3、IP3R、CaM水平下降。
结论:
1.五加丹方可有效缓解MPS大鼠体温的升高。五加丹方可以增加去势大鼠子宫重量,升高子宫指数,以高剂量组及中剂量组效果明显。
2.五加丹方可以改善MPS大鼠子宫的微观形态,使子宫腺体和毛细血管明显增多,以高剂量组最为明显。
3.五加丹方能够有效升高MPS大鼠血清E2水平,降低血清FSH、LH水平,五加丹方可以提高去势雌性大鼠体内雌二醇水平或者促进体内雌二醇的转化生成,从而起到改善MPS的作用。
4.五加丹方通过对MPS大鼠下丘脑弓状核促性腺激素释放激素GnRH的上游调节因子Kiss-1、GPR54及PLC-β1、IP3、IP3R、CaM等表达的影响,起到下调GnRH mRNA和蛋白表达的作用,从而协调生殖轴功能,改善MPS患者生殖内分泌水平。