组织透明技术是近年来人类医学和动物医学研究比较热门的话题,它能够在不破坏组织整体结构下,通过现有的一些成像技术观察其内部的三维结构信息,受到很多科研人员的青睐。现有的组织透明技术在操作复杂性、荧光兼容性以及组织形变等方面尚不完善,因此开发新型透明技术势在必行。本文首先对动物组织固定技术和组织透明技术进行了综述,对现有经典的动物组织透明技术进行比较分析,然后以优化组织透明效果为出发点,开展了以下两部分试验研究:(1)在长期试验中发现组织灌注固定的充分性在组织透明中非常重要,灌注是否充分直接会影响组织最终的透明效果,本课题采用改进的双侧颈总动脉灌注技术灌注固定大鼠和兔脑组织,然后对脑组织的进行HE染色和免疫荧光试验,最后对脑组织切片进行透明处理检测透光率。结果显示,与传统经心脏灌注技术相比,双侧颈总动脉灌注技术需要的灌注液和固定液可节省50%以上;脑组织切片透光率更高,近红外波长区域检测结果统计分析具有显著性差异(P<0.05);同时,HE染色和免疫荧光效果也较好,与传统灌注技术相比脑组织内红细胞数量显著减少(P<0.05),组织灌注固定更充分。(2)开发新型水溶性透明技术。经不断试验摸索,现已研发出一种亲水型的透明溶液。试验利用该溶液对小鼠和兔脑组织和肝组织进行透明化处理、使用饱和苏丹Ⅲ透明溶液对脑组织进行整体染色,使用1%苦味酸天狼猩红透明溶液对肝组织整体染色,最后对透明组织进行切片,观察透明组织细胞水平上的变化。结果显示,小鼠脑处理2周左右会变得较透明,而兔脑的嗅球整体透明较好;小鼠脑苏丹Ⅲ整体染色较好,可见白质纤维的神经走向;小鼠肝和兔肝整体染色均匀,能较好区分肝脏内部血管网络。透明处理后的小鼠脑经冰冻切片尼氏染色和luxol fast blue染色可见脑组织内部较完整的细胞核,但胞浆有融合现象,细胞之间的间隙增大。结果表明,双侧颈总动脉灌注技术可以节省灌注和固定试剂,并使灌注更充分,同时提高动物脑组织透明的透光率,为动物透明脑的研究提供技术保障;开发的水溶性透明技术可实现组织透明和染色的兼容,且可在2-3周左右实现组织透明和染色。