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二球悬铃木在我国是一种重要的园林绿化树种,具有良好的杂种优势。但是在4、5月份花粉、种毛随处飘落,不仅污染环境,还会严重影响人们生活。为解决这一问题,许多科研工作者在改进栽培管理措施、选育少果品系、化学或物理诱变等方面做了许多研究,但是都不能从根本上解决问题。通过组织培养和基因工程进行遗传改良是一种更加有效的育种手段。悬铃木研究的最终目的是培育不育的新品种,这一目标要通过转化不育基因来实现。进行遗传转化需要首先建立稳定的快繁体系和高频的植株再生体系。本研究中取不同基因型悬铃木的外植体培养,结合实验室保存的无菌材料,建立新的快繁体系和叶片再生体系,并优化已有的悬铃木转化体系,尝试将早花基因PtLFY转入悬铃木中。另外,对实验室保存的抗性植株进行增殖培养、PCR检测和练苗移栽。主要研究结果如下:1.取PE、P19、四倍体的柄下芽进行消毒培养,结果表明取秋季的柄下芽或春季新萌发的枝条中部的4-6个芽培养萌芽率较高。升汞消毒最佳时间为8min(11月)或12min(4月),在启动培养基MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.05mg/L上,P19的柄下芽萌芽率最高;PE的萌芽率为33.3%;四倍体柄下芽的诱导最难,萌芽率只有13.3%。P19柄下芽诱导的最佳培养基是MS+6-BA 0.3mg/L+NAA 0.05 mg/L。2.在培养基MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.05 mg/L上,PH2的增殖系数最高3.9,P19其次为2.5,PE仅为1.6。对PH2来说,基本培养基MS和WPM对试管苗增殖的影响不大,1/2MS不适合增殖。以MS为基本培养基时,PH2增殖的最佳激素组合是6-BA0.6mg/L,P19增殖的最佳组合是6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.05 mg/L。3.在相同培养基MS+IBA 0.1 mg/L上,PH2不定根数最多,多达7.0根,主根较粗、侧根发达;PE不定根数量较少、较短,每株平均4.2根;P19平均根数为6.4。对PH2来说,MS、WPM、1/4MS不适合生根,1/2MS是最佳的基本生根培养基;以1/2MS为基本培养基时,0.1mg/LIBA的生根效果最好。4.在培养基MS+BA 6.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L上,PH2叶片再生率为44%,P19仅为12%。PH2叶片再生的最佳激素组合为MS+BA 4.0 mg/L+IBA1.0mg/L,P19叶片再生的最佳激素组合是MS+BA 6.0 mg/L+IBA 0.5mg/L。先经过7d的暗培养再转入光照下培养,对PH2叶片不定芽的分化有促进作用。5.在PtLFY的转化中,优化了根癌农杆菌介导的以悬铃木叶片为受体的转化体系,结果发现EHA105是较适合悬铃木叶片转化的菌株;生根培养40d-50d的植株叶片最适合浸染;用0.4mol/L的甘露醇溶液预处理叶片5h对叶片伤害小且能促进转化;延迟选择是悬铃木叶片转化中较合适的选择方式。通过优化后的遗传转化体系,共得到抗性芽5个,在增殖培养中玻璃化死亡。6.实验室保存的抗性植株在一年继代培养后,经PCR检测7个株系全部为阳性:继代两年后,经PCR检测7个株系依然为阳性。7.取生根40-50d的、根数较多、植株强壮的试管苗移栽成活率最高,两种抗性植株、P19、PH2经练苗10d移栽最好,最佳移栽基质为腐殖土:珍珠岩:河沙(1:1:1)。普通试管苗PH2和P19的移栽成活率明显高于两种抗性苗。