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[目 的]GRP78又称为免疫球蛋白重链结合蛋白（immunoglobulin heavy chain binding protein,Bip）,主要定位在内质网上,GRP78在各种类型的肿瘤细胞和组织中高表达,且部分文献报道其表达水平跟不良预后相关。在结直肠癌细胞中,内质网应激情况下,GRP78在结直肠癌细胞中作用机制尚未明确,本研究旨在探讨内质网应激情况下GRP78表达是否影响结直肠癌细胞生物学行为,并探讨可能机制。[方法]1.运用GEPIA2验证编码GRP78的基因HSPA5在结直肠癌组织和正常组织中的表达情况;以人正常结肠上皮细胞NCM-460为对照,利用Western blot技术比较结直肠癌细胞系RKO、HCT116、SW480、HT29细胞中GRP78蛋白相对表达量。选出最高表达GRP78的两株结直肠癌细胞。2.构建GRP78敲减慢病毒（GRP78shRNA）,感染GRP78高表达的两株结直肠癌细胞系RKO和HCT116,并设置敲减GRP78细胞株为shGRP78实验组,转染慢病毒空载体的细胞株为shNC阴性对照组。经嘌呤霉素筛选后建立稳定敲减GRP78的结直肠癌细胞株,并用Western blot检测GRP78的敲减效率。3.利用MTT和平板克隆形成实验检测GRP78敲低对结直肠癌细胞增殖能力的影响;采用划痕实验观察GRP78敲低对结直肠癌细胞迁移能力的影响。4.使用6μM浓度的毒胡萝卜素Thapsigargin作用RKO细胞,1μM浓度的Thapsigargin作用HCT116细胞,以诱导内质网应激,分别在0h、24h、48h提取细胞总蛋白,应用Western blot检测GRP78及内质网应激相关分子表达的情况。5.内质网应激情况下采用MTT和平板克隆形成实验检测敲低GRP78对结直肠癌细胞增殖能力的影响;应用Western blot检测内质网应激情况下,GRP78敲低对PI3K/AKT通路蛋白、内质网应激相关蛋白、凋亡分子cleaved-caspase12、cleaved-caspase3及自噬相关蛋白表达的影响。[结 果]1.HSPA5在结直肠癌的癌组织中的表达水平显著高于正常组织;与正常结肠上皮细胞系 NCM-460 相比,GRP78 在 RKO、HCT116、HT29、SW480 中的表达水平均增加,且RKO和HCT116细胞中GRP78表达最高。2.Western blot检测GRP78蛋白的结果显示,构建的GRP78shRNA显著降低结直肠癌细胞RKO和HCT116细胞中GRP78蛋白的表达（p均＜0.0001）;3.MTT实验结果显示,与第0天相比,shGRP78组RKO细胞和HCT116细胞的增殖速度在第3天和5天与shNC组相比降低;平板克隆形成实验的结果显示,与shNC组相比,shGRP78组细胞的克隆形成能力明显减弱;划痕实验结果显示,shGRP78组的细胞愈合率较shNC组明显减弱。4.Western blot结果显示GRP78、PERK、IRE1α、ATF6蛋白的表达在应激的条件下适应性的上调,表明Thapsigargin所诱导的内质网应激模型建立成功。5.MTT实验结果显示,与第0天相比,shGRP78组细胞的增殖速度在第1天、第3天和第5天与shNC组相比降低。平板克隆形成实验的结果显示,与shNC组相比,shGRP78组细胞的克隆形成能力明显减弱。Western blot结果显示内质网应激情况下,与shNC组相比,shGRP78组P-PI3K、P-AKT蛋白的相对表达量降低,但PI3K和AKT蛋白表达量无明显差异;内质网应激相关分子PERK、IRE1α、ATF6 相对表达量增加;凋亡分子 cleaved-caspase12 及 cleaved-caspase3的相对表达量增加;自噬相关蛋白LC3 Ⅱ相对表达量增加,P62相对表达量降低。[结 论]1.敲低GRP78蛋白的表达水平抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移能力。2.内质网应激诱导GRP78表达增加。3.内质网应激情况下,敲减GRP78的表达加重了内质网应激和细胞自噬的程度,并促进细胞凋亡。4内质网应激情况下,敲低GRP78蛋白的表达水平抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且GRP78可能通过上调PI3K/AKT通路蛋白相对表达量、抑制内质网应激相关凋亡途径来促进结直肠癌细胞生存并抑制其凋亡。