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壬基酚(4-n-Nonylphenol,4-n-NP)是生活中广泛存在的环境激素,它们在自然环境中不易降解,具有较强的生物累积性,对于机体内各脏器都具有损害作用,研究4-n-NP及其同分异构体的生物学效应已成为热点。本文以体外培养的NCTC Clone 1469小鼠肝细胞株作为毒理学模型,探讨了4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的毒性作用、氧化应激作用、凋亡作用,以及壬基酚异构体对NCTC Clone 1469细胞胆汁酸分泌的影响,为壬基酚及其异构体的环境风险评估提供理论依据。首先,本论文探讨了4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的毒性作用,得出结果如下:(1)60、80、100μmol/L 4-n-NP作用于NCTC Clone 1469细胞可显著抑制细胞生长,改变细胞形态,并导致培养液中LDH、ALT、AST活性显著升高;(2)4-n-NP(1-40μmol/L)可上调NCTC Clone 1469细胞内雌激素受体ERα、ERβmRNA及蛋白表达;(3)雌激素拮抗剂ICI 182780无法减弱4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的毒性作用。结果表明,4-n-NP可对NCTC Clone 1469细胞产生毒性作用,并在一定浓度范围内可刺激细胞内雌激素受体表达,且两者无关。第二,本论文从抗氧化酶系统及过氧化产物两方面综合探讨了4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞的氧化应激作用,得出结果如下:(1)4-n-NP可使NCTC Clone 1469细胞内ROS水平及MDA含量升高;(2)60μmol/L 4-n-NP显著降低NCTC Clone 1469细胞内SOD、CAT活性;(3)抗氧化剂NAC可显著减弱4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞产生的毒性作用。由此结果推测4-n-NP对NCTC Clone 1469细胞产生的毒性作用或与氧化应激作用有关。第三,本论文利用流式双染法及免疫印迹法探讨了4-n-NP对NCTC Clone1469细胞的凋亡作用及潜在机制,得出结果如下:(1)4-n-NP可活化NCTC Clone1469细胞内凋亡相关蛋白酶(Caspase-3、Caspase-12);(2)20-60μmol/L 4-n-NP可上调NCTC Clone 1469细胞内促凋亡相关蛋白Bax的表达,同时下调细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;(3)1-60μmol/L 4-n-NP药物组均可导致NCTC Clone1469细胞凋亡率及钙离子水平升高且具有浓度依赖性;(4)Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK或Caspase-12抑制剂Z-ATAD-FMK均可抑制NCTC Clone 1469细胞凋亡并降低细胞内钙离子水平。最后,本论文通过酶联免疫吸附实验、反转录聚合酶链式反应探究12种4-NP异构体对NCTC Clone 1469细胞总胆汁酸分泌量及胆汁酸代谢相关基因表达的影响,结果表明60μmol/L 4-NP37、4-NP111、4-NP112、4-NP194可使NCTC Clone1469细胞总胆汁酸分泌量显著升高,并促进细胞内雌激素受体ERα、胆汁酸代谢相关基因(CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1)表达,推测此4种壬基酚异构体促使NCTC Clone 1469细胞总胆汁酸分泌量增加或与刺激ERα、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 mRNA表达有关。综上所述,本研究明确了4-n-NP对NCTC Clone 1469小鼠肝细胞所造成的损伤作用包括细胞毒性、氧化应激及凋亡;4-NP异构体可改变NCTC Clone 1469小鼠肝细胞总胆汁酸分泌量,其潜在途径或与4-n-NP影响细胞内雌激素受体基因、胆汁酸代谢相关基因表达有关。